蛋白质含量的测定方法有哪些
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发布时间:2022-05-26 21:20
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懂视网
时间:2022-10-09 17:24
1、凯氏定氮法
凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收,再以标准盐酸滴定,就可计算出样品中的氮量。
由于蛋白质含氮量比较恒定,可由其氮量计算蛋白质含量,故此法是经典的蛋白质定量方法。
2、双缩脲法
双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。
当底物中含有肽键时(多肽),试液中的铜与多肽配位,配合物呈紫色。可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。鉴定反应的灵敏度为5-160mg/ml。鉴定反应蛋白质单位1-10mg。
3、酚试剂法
取6支试管分别标号,前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液,最后一支试管加待测蛋白质溶液,不加标准蛋白溶液,在室温下放置30分钟,以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照,于650nm波长处测定各管中溶液的吸光度值。
4、紫外吸收法
大多数蛋白质在280nm波长处有特征的最大吸收,这是由于蛋白质中有酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸存在,可用于测定0.1~0.5mg/mL含量的蛋白质溶液。
取9支试管分别标号,前8支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液,1号试管不加标准蛋白溶液,最后一支试管加待测蛋白质溶液,而不加标准蛋白溶液,每支试管液体总量通过加入蒸馏水补足而保持一致,将液体混合均匀,在280nm波长处进行比色,记录吸光度值。
5、考马斯亮蓝法
考马斯亮蓝显色法的基本原理是根据蛋白质可与考马斯亮蓝G-250 定量结合。当考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合后,其对可见光的最大吸收峰从 465nm 变为 595nm。
在考马斯亮蓝 G-250 过量且浓度恒定的情况下,当溶液中的蛋白质浓度不同时,就会有不同量的考马斯亮蓝 G-250 从吸收峰为 465nm 的形式转变成吸收峰为 595nm 的形式,而且这种转变有一定的数量关系。
一般情况,当溶液中的蛋白质浓度增加时,显色液在 595nm 处的吸光度基本能保持线性增加,因此可以用考马斯亮蓝 G-250 显色法来测定溶液中蛋白质的含量。
热心网友
时间:2024-10-21 17:51
蛋白质含量测定的方法有微量凯氏定氮法、双缩脲法、folin―酚试剂法、考马斯亮兰法、紫外吸收法等。
1、微量凯氏定氮法:含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。
2、双缩脲法:双缩脲是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,称为双缩脲反应。
3、folin―酚试剂法:这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难,近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。
4、考马斯亮兰法:1976年由bradford建立的考马斯亮兰法,是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。
5、紫外吸收法:蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。
热心网友
时间:2024-10-21 17:52
蛋白质含量测定的方法有微量凯氏定氮法、双缩脲法、folin―酚试剂法、考马斯亮兰法、紫外吸收法等。
1、微量凯氏定氮法:含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。
2、双缩脲法:双缩脲是两个分子脲经180℃左右加热,放出一个分子氨后得到的产物。在强碱性溶液中,双缩脲与CuSO4形成紫色络合物,称为双缩脲反应。
3、folin―酚试剂法:这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法,由于其试剂乙的配制较为困难,近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。
4、考马斯亮兰法:1976年由bradford建立的考马斯亮兰法,是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。
5、紫外吸收法:蛋白质分子中,酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键,使蛋白质具有吸收紫外光的性质。吸收高峰在280nm处,其吸光度(即光密度值)与蛋白质含量成正比。
简述几种蛋白质含量的测定方法及原理。
【答案】:蛋白含量的测定常用的方法有:考马斯亮兰G-250染色法、双缩脲法、福林一酚试剂法、紫外吸收法。(1)考马斯亮兰G-250染色法:考马斯亮兰G-250在酸性溶液中为棕红色,当它与蛋白质结合后变为蓝色,在595nm处有最大的光吸收,其颜色深浅与蛋白质浓度成正比。因此可比色测定,测定范围为...
蛋白质含量的测定方法有哪些
蛋白质含量测定的方法有微量凯氏定氮法、双缩脲法、folin―酚试剂法、考马斯亮兰法、紫外吸收法等。1、微量凯氏定氮法:含氮有机物即分解产生氨(消化),氨又与硫酸作用,变成硫酸铵。经强碱碱化使之分解放出氨,借蒸汽将氨蒸至酸液中,根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。2、双缩...
简述几种蛋白质的测定方法。
2.双缩脲法。双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法,硫铵不干扰显色, Cu2+与蛋白质的肽键,以及酪氨酸残基络合,形成紫蓝色络合物,此物在540nm波长处有最大吸收。首先利用标准蛋白溶液和双缩脲试剂绘制标准曲线,将待测血清与硫酸钠在待测试管中混合,并用只加入硫酸钠不含血清的试管作...
蛋白质定量测定的方法有哪些
蛋白质定量测定的方法 一、凯氏定氮法 凯氏定氮法是一种经典的蛋白质测定方法。该方法通过测定样品中氮的含量,进而推算出蛋白质的含量的。其原理是样品中的氮在催化剂的作用下,经高温分解,生成氨并与硫酸结合生成硫酸铵。通过滴定法测定生成的氨,从而计算出样品中的蛋白质含量。二、双缩脲法 双...
测定蛋白质含量方法有哪些
测定蛋白质含量方法有多种。一、凯氏定氮法 凯氏定氮法是一种经典的蛋白质含量测定方法。该方法通过消化样品中的蛋白质,使其中的氮元素释放出来,然后通过化学方法测定氮含量,进而推算出蛋白质含量。这种方法适用于多种样品,包括食品、生物样品等。二、双缩脲法 双缩脲法是一种快速、准确的测定蛋白...
常用来测定蛋白质含量的方法有哪些?优缺点是什么?
1、凯氏定氮法 凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。即在有催化剂的条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐,然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收,再以标准盐酸滴定,就可计算出样品中的氮量。由于蛋白质含氮量比较恒定,可由其氮...
如何准确测定样品中蛋白质的含量
(1)试剂:a、标准蛋白质溶液:用标准的结晶牛血清清蛋白或标准酪蛋白,配制成10mg/ml的标准蛋白溶液,可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。 如有需要,标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,计算出其纯度,再根据其纯度,称量配制成标准蛋白质溶液。牛血清清蛋白用0.9%nacl配制,酪蛋白用0.05n ...
测定蛋白质含量有哪些方法
测定蛋白质含量有以下方法:1. 凯氏定氮法 这是测定总蛋白质含量的一种经典方法。其原理是通过催化剂消解样品中的蛋白质,使蛋白质中的氮元素释放出来,然后通过化学方法测定氮含量,从而计算蛋白质含量。该方法具有准确度高、操作相对简单的特点。但所需时间较长,需要使用特定的化学试剂和仪器。2. 双...
蛋白质含量测定方法有哪些
一、凯氏定氮法 凯氏定氮法是一种经典的蛋白质含量测定方法。它基于氮含量与蛋白质含量的关系来推算。具体操作流程包括样品消化、蒸馏、氮的吸收以及滴定等步骤,最终通过计算得到蛋白质含量。这种方法适用于各种食品、生物制品等蛋白质含量的测定。二、双缩脲法 双缩脲法是一种基于蛋白质中的肽键与...
测定蛋白质含量的方法及原理
测定蛋白质含量的方法有多种,常用的包括比色法、光谱法和生物学法。以下是对这一问题的详细描述:1.比色法尺度法 比色法是测定蛋白质含量最常用的方法之一。原理是利用蛋白质与染色剂反应生成复合物,进而通过比色反应来测定蛋白质浓度。例如,布拉德福酸染色法Bradfordmethod和比二巴氏法BicinchoninicAcid...