Hoechst 33258染色实验(原理,介绍,步骤,所需试剂)

发布网友发布时间：2024-10-20 11:57

共1个回答

热心网友时间：2024-11-15 03:00

Hoechst 33258是一种用于细胞染色的染料，其原理是它能与双链DNA的小沟结合，优先与富含腺嘌呤和胸腺嘧啶的序列结合，发出蓝色荧光。在活细胞或固定细胞中，Hoechst 33258能作为细胞核标记物，用于细胞周期研究和区分凋亡细胞的核形态。

为了进行Hoechst 33258染色实验，需要配制两种溶液：储备液和工作液。储备液需使用1mg Hoechst 33258和0.01mol/L的PBS（pH 7.4）混合，总量为5ml。工作液的最终浓度需调整为0.5μg/ml，通过将125μl储备液与50ml0.01mol/L的PBS（pH 7.4）混合来制备。

实验步骤如下：首先，准备细胞悬液或培养单层细胞等标本，并使用醋酸-乙醇或Carnoy固定液进行固定。接着，用0.01mol/L的PBS漂洗标本5分钟。然后，使用Hoechst 33258工作液对标本染色，室温下放置15分钟左右。随后，用0.01mol/L的PBS对染色的标本进行漂洗三次，每次5分钟。最后，用甘油与PBS的1:9混合液或水溶性封片剂对标本进行封片，通过荧光显微镜观察。

实验结果表明，Hoechst 33258是一种DNA的特异性荧光探针，其染色的细胞核呈现出明亮的蓝色荧光。这一染色方法在生物学研究中具有重要价值，能有效帮助科学家们了解细胞的结构和功能。