腺苷脱氨酶测试方法介绍

发布网友发布时间：2024-10-05 06:15

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热心网友时间：2024-10-07 13:38

随着对腺苷脱氨酶(ADA)研究的深入，检测技术历经四代演变。第一代检测法，由Kaplan法（1955年）建立，通过测量265nm处腺苷的吸光度下降速度，但因底物浓度低（40μM以下）可能导致失真，不适合临床使用。

第二代测试基于腺苷脱氨酶的显色反应，如Berthelot法，能测定氨生成量，但灵敏度低，易受外源性NH3干扰。第三种方法是通过偶联GLDH反应测量NADPH吸光度，同样受血清氨和NADPH非特异性氧化的影响。

进入第三代，Kalckar氏采用连续监测法，通过尿酸盐的吸光度上升来测ADA，但293nm的血清吸光度过高，影响临床实用性。而第四代，通过PNP、XOD、过氧化氢酶和醛脱氢酶的反应，测量NADPH吸光度上升，成本高，制约了其在临床中的应用。

最新的改进是将PNP、XOD与过氧化物酶反应结合，利用EHSPT和4-AA进行Trinder氏反应，测定有色醌在550nm处的吸光度上升。这种方法具有高精密度、抗干扰性强，适用于自动化快速测定，为临床ADA检测提供了更好的条件。

扩展资料

腺苷脱氨酶（EC:3.5.4.4 adenosine deaminase ADA）是嘌呤核苷代谢中重要的酶类，属于巯基酶，每分子至少含2个活性巯基，其活性能对氯汞甲酸完全抑制。ADA能催化腺嘌呤核苷转变为次黄嘌呤核苷，再经核苷磷酸化酶作用生成次黄嘌呤，其代谢缓和终产物为尿酸。