我是做ELISA实验的初学者，最近在建立双抗体夹心法的检测方法，不知道如何确定包被浓度和抗原浓度，谢谢！
发布网友
发布时间：2022-05-21 03:40
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热心网友
时间：2023-10-13 11:00
我这里有份ELISA的实验过程。不过是除掉前两部的。
1、 加被检抗原（重组蛋白或自然样品）：用稀释液（DS01、AS01、AS02、AS03、AS04）将被检抗原按实验设计稀释，每孔100µl，同时用稀释液作空白对照。封板膜封板，室温放置两小时。
2、 洗涤：到尽板孔中的液体，加满洗涤液（WS03），静止放十秒，洗四次，最后在毛巾或吸水纸上拍干板子：
3、 加检测抗体：将生物素标记的检测抗体稀释适当浓度（稀释液DS01），每孔100 µl封板膜封板，室温放置一小时：
4、 洗涤：到尽板孔中的液体，加满洗涤液（WS03），静止放十秒，洗四次，最后在毛巾或吸水纸上拍干板子：
5、 加亲和素-辣根过氧化酶（HRP）稀释适当浓度（稀释液HD01）每孔100µl，封板膜封板，室温放置30分钟：
6、 加底物：新鲜配制的四甲基联苯胺溶液（TMB），每孔100µl，室温暗处放置30分钟：
7、 加终止液（SS01）：每孔100µl，立即读值：
8、 观察结果：用酶标仪记录450nm读数.
