如何提质粒?
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发布时间：2022-05-04 18:06
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热心网友
时间：2022-06-24 13:23
方法二：人工提取 比较复杂污染相对高。但是便宜且随时可以操作。简述如下：
1. 接菌。将适量菌体接入含有相同抗性的LB培养基中，37°C摇床培养过夜。
2. 将菌液4000r/min离心1min，弃掉上清
3. 加150微溶液1悬浮细胞，静置10分钟
4. 加200微溶液2（必须新鲜配制），轻轻混匀，至液体清亮。
5. 上步操作5min之内加入溶液3，混匀。冰上15min。
6. 12000r/min离心10min，小心吸出上清转移到另一个小指管中。弃掉沉淀的蛋白。
7. 加入等体积的酚：氯仿：异戊醇（25:24:1），漩涡混匀，12000r/min离心5min，上清转移到另一小指管。
8. 加等体积氯仿：异戊醇（24:1），漩涡混匀，12000r/min离心10min，上清转移到另一小指管。
9. 上清中加2倍体积无水乙醇，混匀后室温30min。12000r/min离心10min，吸去上清。
10. 用1ml的70%乙醇洗涤沉淀2次（每次12000r/min离心5min）。吸去上清后，烘干或者空转，直至沉淀透明
11. 加20微的RTE（含有RNA酶的TE缓冲液，没有的话无菌水也可以），溶解质粒DNA，-20℃保存。
呼呼手打好累。溶液123的配方网上应该都有的吧。没有我再给你打。另外我们一般不图纯度的话，不用什么酚氯仿异戊醇的，直接用70%乙醇洗两次也可以，感觉没太大影响。
热心网友
时间：2022-06-24 13:23
