毛细管电泳分离蛋白质多肽类物质一般用什么缓冲溶液，什么条件呢？
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发布时间：2022-05-05 01:57
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时间：2023-10-09 09:41
硼砂、磷酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐和醋酸
缓冲体系的pH值要求与样品的性质有关
通常酸性组分的分离选择在碱性条件下进行,碱性组分则选择酸性介质分离
蛋白质、多肽、氨基酸等两性物质,可选酸性(pH2)也可选碱性(H>9)分离介质。
在毛细管电泳分离中
缓冲液是背景电解质
分离是基于样品中各个组分间质荷比的差异。
有时需在缓冲液中加入定的添加剂,用以提高分离选择性,改变电渗流的大小、方向或抑制毛细管壁的吸附等。
影响分离的操作条件为
◆分离电压
◆背景电解质种类、浓度和pH
◆添加剂种类和浓度
1.分离电压
分离效率与电压间存在极大值。极大电压通常也是最佳工作电压。
在实际分离中,如果所用的毛细管很细或缓冲液的电导很低,极大电压可能会超出仪器范围,此时没有最佳电压,可选择仪器允许的最大输出电压。
・当毛细管较粗或缓冲液电导较高时,极大电压可能很小,若此时分离度很高,也可选择大于极大值的电压进行分离
2.分离温度
毛细管的温度不仅影响分离的重视性,而且影响分离效率。
温度选择应考虑热效应、分析重现性、分离效率和分离介质对温度的*等因素。
・温度的确定也应通过实验,多数情况下,在20~30℃之间进行电泳,能获得良好的分离效果。可根据初步分离结果调整温度
・蛋白质分离需要低于室温的分离条件。演
3.背景电解质
对背景电解质的要求:
①在所选择的pH范围内有足够大的缓冲容量。
②在检测波长处的吸收低。
③自身的淌度低,即分子大而荷电小,以减少电流的产生
④应使被测组分带合适的电荷量,以实现有效进样和有合适的电泳淌度
⑤尽可能采用酸性缓冲溶液,在低pH下,吸附和电渗流值都很小。
⑥与毛细管种类匹配,涂层毛细管只能在一定pH范围内使用
