我现在才开始接触细胞生物学，谁能告诉我一下单克隆抗*备流程？谢谢！成都这边有哪些生产企业？
发布网友
发布时间：2022-04-23 09:42
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热心网友
时间：2023-10-09 20:31
1. 免疫动物：三只Balb/c小鼠
2. 佐剂：首先用完全弗氏佐剂（CFA），后用不完全弗氏佐剂（IFA）。
3. 免疫原：蛋白或KLH偶联多肽。每次免疫使用50-100μg免疫原。
4. 免疫：用PBS稀释免疫原，然后与相应的佐剂1：1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，将该乳剂在小 鼠双肩周围的皮肤下进行皮下注射和后腿进行肌肉注射。每个区域大约用1/8的免疫原。接着将1/2的免疫原进行腹腔注射，这样免疫原可以持久存在从而提高免疫应答。以后每个星期进行腹腔注射直到达到要求的效价。
5. 第0星期 预采血
完全弗氏佐剂（CFA）混合的100μg抗原免疫小鼠。
第2星期
完全弗氏佐剂（CFA）混合的50μg抗原免疫小鼠。
第3星期
不完全弗氏佐剂（IFA）混合的50μg抗原免疫小鼠。
第4星期
溶解在PBS中的50μg抗原免疫小鼠。
第5星期
取适当的细胞或组织进行ELISA和WB检测，
溶解在PBS中的50μg抗原免疫小鼠。
第X星期
取适当的细胞或组织进行ELISA和WB检测，
溶解在PBS中的50μg抗原免疫小鼠。
6. 杂交瘤融合和筛选：用PEG方法将效价最好的小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞F0进行融合。用抗原对融合的杂交瘤克 隆进行筛选，检测它们的特异性和敏感性。ELISA阳性的克隆可用WB检测，筛选出来的克隆至少还需要亚克隆两次。
7. 大规模抗体生产：筛选得到两个克隆最后进行大规模培养（每个克隆1L）或者取腹水（每个克隆5只小鼠）。 用蛋白A/G对培养液或腹水进行纯化，平均每个克隆可以得到3-5mg 抗体。
8. 注意：每个融合平均可以得到900多个克隆，对于多肽抗原可以得到100个左右的ELISA阳性克隆，重组蛋白抗原可以得到100-150个ELISA阳性克隆。亚克隆实验做的越早，越容易保存克隆。因此，为了保存和复苏阳性克隆，尽早进行筛选检测是必需的。
热心网友
时间：2023-10-09 20:31
成都那边的不了解
