研究小组从小鼠血管内皮细胞分离到一个新基因,请设计一个研究方案对该基因进行定性、定量以及定位分析。
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发布时间:2023-01-04 13:58
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热心网友
时间:2023-10-13 11:35
1)首先确认这是一个真正的基因,然后克隆到带标签的真核表达载体,转染细胞,检测蛋白的表达。同时注意观察对细胞增殖啦形态啦有没有什么影响,这个可能性不是很大,但注意细节。
2)同时用这个序列在NCBI做blast,找其同源序列,有没有序列类似,可能是同一蛋白家族成员的。寻找其在其他物种中有没同源序列,功能是否已知。这些可以作为功能研究提示。
3)设计其RNAi片段,做基因敲除,看敲除后老鼠有没有表型,如果有,是非常非常重要的功能提示。
4)如果实在没有得到什么线索,可以选择做酵母双杂交,筛选其相互作用蛋白,看它是不是通过跟功能已知的蛋白互作来*细胞功能的,这是研究新基因的非常重要的方法。
总之,找到一个新基因就像认识一个新人,先确认他是个人,然后找跟他相似的,亲戚,兄弟姐妹。然后看他的工作是什么,把他去掉,哪个环节会出现问题。然后找他的一帮朋友,很可能他的朋友是已知的,那么看他和朋友之间的联系。