质粒的载体构建
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发布时间：2022-04-23 09:15
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时间：2023-05-18 13:37
pBR322质粒载体的构建过程可简单地概括如下：
1、由于pBR322质粒的亲本之一是pMB1质粒，故首先以pMB1为基础，引入Rldrd19质粒的Tn3易位子，得到13.3kb的pMB3质粒；
2、pMB3的分子量显然使得它不适合作为载体，所以要通过在EcoRI活性条件下的消化让它大部分的无用片段失去，留下来的小片段的DNA的黏性末端连接起来后就形成了pMB8质粒（2.6kb）；
3、此时，另外一种pSC101质粒在EcoRI活性条件下消化产生了含有tetr抗性的DN*断，这个片断和pMB8整合在一起就形成了pMB9质粒（5.3kb）。此时pMB9为ampstetr表型；
4、pMB9已经初步具备载体的功能，为了让它更加完善，我们要让它具备amprtetr性能，即在pMB9上引入pSF2124的Tn3易位子，但Tn3可以来也可以走，为了留住它，我们切去了Tn3中表达转位酶的基因，形成了pBR313质粒。
此后我们兵分两路：一路把pBR313的PstI位点除去，使之成为ampstetr表型的pBR318质粒；
5、；另一路把pBR313的EcoRⅡ的位点切除，使之成为amprtets表形的pBR320质粒。
由此我们的到了两种功能互补的质粒，这样我们只要将他们杂交就可以得到一种接近全能的载体质粒了，这就是pBR322。
