列表比较pBR322和pUC8重组细胞的筛选过程的异同?
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发布时间：2022-04-29 14:52
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热心网友
时间：2023-10-12 23:47
咨询记录 · 回答于2021-10-30列表比较pBR322和pUC8重组细胞的筛选过程的异同?8 重组体的筛选和鉴定 筛选(Screening))遗传表型(phenotype):是生物体遗传组成同环境 相互作用所产生的外观或其他特征。?本章教学目的和要求:掌握常用的抗生素抗性筛选、蓝白斑筛选、酶切筛选、酶 联免疫吸附测定(ELISA)和免疫印迹(Western blotting)法的原理;了解转译筛选法和真核生物的报道 基因筛选法。?重点:常用的抗菌素抗性筛选、蓝白斑筛选、酶切筛选、酶联免 疫吸附测定(ELISA)难点:免疫印迹(Western Blotting)法的原理??????转化子:接纳载体或重组分子的转化细胞。非转化子:未接纳载体或重组分子的转化细胞。 重组子:含有重组 DNA 分子的转化子。 非重组子:仅含有空载载体分子的转化子。期望重组子:含有目的基因的重组子。非期望重组子:不含有目的基因的重组子。 8.1 遗传学检测法 一、利用载体提供的表型特征筛选重组体1抗药性标记及其插入失活选择法 原理: oBR322 质粒上有两个抗生素抗性基因:rr Tet 和 Amp。。 r Tet 上有插入位点 BamH l和 Sal l;r Amp 上有插入位点Pstl。。pBR322 因插入外源 DNA 而导致基因失活的现象称之为 插入失活效应。 Pst|酶切 外源 DNA 黏性未端 连接酶 Pst!酶切0BR322 4363 重组子(amp s tet r)空载体(amp r tetr)插入子(amp s tet s)导 入 黏性末端 重组子转化子(amp s tet r)空载体转化子(amp rtet r)影印在含 Ap 的平板上 涂布在含 Tc 的平板上 野生型的 E.coli( amp s tet s)空载体转化子(amp rtet r)对比两个平板上的菌落，凡在 Tc 平板上生长而在 Ap 平板上不能生长的菌落则是 重组质粒转化子克隆，挑选阳生克隆，分离出重组质粒。pBR322 抗菌素标记选择
