重组蛋白表达之组氨酸标签(His-tag)

发布网友发布时间：2024-10-24 09:40

共1个回答

热心网友时间：2024-11-07 04:25

重组蛋白表达中，组氨酸标签（His-tag）是一种常用的策略。它的目的是通过提高蛋白溶解度并便于纯化，优化重组蛋白的生产。不同的标签选择取决于纯化和功能需求。His-tag，以其六个连续组氨酸残基的特性，常作为纯化标签使用，其优点包括：

1. 小分子量，对蛋白质结构和功能影响小；

2. 免疫原性低，便于抗体制备；

3. 可与Ni2+、Co2+等金属离子形成配位，便于亲和层析纯化；

4. 适用于多种表达系统，纯化条件温和；

5. 适合处理变性蛋白，利于包涵体蛋白纯化。

His标签通常位于目标蛋白的N端，便于后续的酶切去除。纯化过程包括Ni柱亲和层析，通过咪唑浓度梯度洗脱，具体步骤包括溶液配制、柱子预处理、上样、洗杂和洗脱。最后，得到的纯化蛋白可进一步分析并用于后续实验。