原位PCR原位PCR的基本方法为

发布网友发布时间：2024-10-24 18:18

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热心网友时间：2024-11-05 06:03

原位PCR是一种分子生物学技术，其关键步骤如下：

首先，组织或细胞的固定至关重要。将细胞或组织固定在四氟乙烯预处理的玻片上，使用多聚甲醛固定并消除细胞内的过氧化酶活性，以保持样本完整性。

接着，进行蛋白酶K消化处理。将组织细胞片置于60微克/毫升的蛋白酶K溶液中，在55℃下消化2小时，然后在96℃下加热2分钟，以终止蛋白酶K的作用。

PCR扩增是在组织切片上进行的。在切片上直接添加PCR反应液，覆盖后加上液体石蜡，放置在专门设计用于原位PCR的扩增仪金属板上，进行循环扩增。某些基因扩增仪具有专门的原位PCR功能。

扩增完成后，使用标记的寡核苷酸探针进行原位杂交，以检测特定的基因序列。在此过程中，待检切片上的非特异性结合位点会被封闭，同时内源性DNA和RNA会被核酶充分消化。

然后，通过生物素化单抗与亲和素系统的结合，将生物素化的DNA报告分子固定在石蜡切片上，进一步进行原位PCR扩增。扩增产物会通过原位核酸杂交，以杂交信号形式显示待测抗原的是否存在。

扩展资料

原位PCR是Hasse等于1990年建立的技术，就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。原位PCR既能分辩鉴定带有靶序列的细胞，又能标出靶序列在细胞内的位置，于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转归有重大的实用价值。