超全攻略 !一文理清免疫荧光实验步骤、技巧及疑难问题

发布网友发布时间：2024-10-14 04:48

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热心网友时间：2024-11-02 10:38

免疫荧光实验是一门实用的技术，它通过荧光标记实现蛋白在细胞内的定位和丰度分析。然而，对于新手来说，掌握实验步骤、技巧和解决常见问题至关重要。以下是免疫荧光实验的详细指南和建议：

IF实验流程包括样本前处理，如细胞固定、封闭、一抗和二抗孵育等。以下是关键步骤：

细胞样本处理：先洗涤，去除培养基，用TBS清洗两次；接着用甲醛固定，注意避免温差变化和甲醛毒性；再次洗涤以去除多余固定液。
石蜡切片样本处理：烤片、脱蜡、抗原修复，确保组织浸没并保持湿润，修复液选择要根据实验需求。
冰冻切片样本：速冻后切片，去除多余OCT，标记疏水边界。
染色步骤：封闭样本，一抗和二抗孵育，洗涤后加入DAPI染色并封片。

实验中需注意的问题包括对照实验设计、细胞密度控制、荧光信号强度、背景干扰和非特异性染色。选择合适的对照样本，保持适宜的细胞密度，优化荧光标记和洗涤过程，以避免这些问题。

ABclonal提供了丰富的细胞器和亚细胞结构标志物抗体列表，帮助实验者找到适合的标记工具。了解并遵循这些步骤和技巧，你将能更好地进行免疫荧光实验，获取理想的结果。