发布网友 发布时间:8小时前
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溶液2中的主要成分是NaOH和SDS,是用来裂解细胞的。因为NaOH遇到二氧化碳容易反应生成碳酸氢钙,影响使用效果,因此要现配现用。SDS的话,低温容易产生沉淀。不过在37°C 水浴一下就好。主要还是NaOH的问题。溶液1主要是让菌体细胞充分悬浊于溶液,没有什么实际意义,可以不要。溶液2是碱液,目的在彻底破坏...
...加入溶液1,容液2,容液3后各有哪些现象,原因是什么?提取质粒DNA的过程中,不同溶液起着关键作用。首先,溶液2,主要由NaOH和SDS组成,用于细胞裂解。NaOH会与空气中的二氧化碳反应生成碳酸氢钙,影响效果,所以需现配现用。SDS在低温下容易沉淀,但只需在37°C的水浴中稳定。这里NaOH的控制尤为关键。溶液1则用来使菌体细胞充分分散,但作用不大,可选择性...
...加入溶液1,容液2,容液3后各有哪些现象,原因是什么?首先,溶液2主要由NaOH和SDS组成,其核心功能是裂解细胞。NaOH的作用在于与二氧化碳反应生成碳酸氢钙,这可能影响提取效果,因此在使用时需现配现用。SDS在低温下容易沉淀,但通过37°C的水浴可以避免。这里的主要挑战在于NaOH的处理。溶液1的作用相对较小,主要是帮助菌体细胞均匀分散在溶液中,但并不必要...
碱裂解法制备质粒dna时,溶液1,2,3中各组分都起什么作用加入溶液1的目的主要是将细菌团块重新溶解于缓冲液中;溶液2含有SDS及NaOH,前者可将细菌溶解,后者可将DNA变性;溶液3是由醋酸和钾盐组成,前者在于中和碱性,后者则有利于染色体DNA的沉淀。高pH使质粒DNA和染色体DNA变性,同时沉淀蛋白质。再将pH值调至中性,质粒DNA较小,很容易复性成双链。而染色体DNA...
提取质粒时有用到溶液1、溶液2、溶液3,分别是什么啊溶液Ⅰ:50mMl 葡萄糖/10mMl EDTA/25mMl Tris-HCl,pH=8.0 溶液Ⅱ:0.2Ml NaOH/1% SDS 溶液Ⅲ:3Ml 醋酸钾/2Ml 醋酸 溶液1称为悬浮液,是用来把细菌悬浮均匀的,为下一步的裂解做准备;溶液2称为裂解液,是裂解细菌菌体,使其释放质粒的,该步骤不能超过5分钟;溶液3称为中和液,用来中和...
碱裂解法提取质粒时,试述溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ的主要成分及作用原理...(2)溶液Ⅱ的主要成分为氢氧化钠(NaOH)和SDS。DNA在pH5~9的溶液中是稳定的,但当pH>12或pH<3时,就会引起DNA双链之间氢键的解离而变性。溶液Ⅱ中NaOH浓度为0.2mob/L,加入溶液Ⅱ后,该系统的pH为12.0~12.6,因而促使染色体DNA与质粒的变性解离成单链。SDS是一种阴离子去垢剂,它的主要...
碱裂解法制备质粒dna时,溶液1,2,3中各组分都起什么作用2. 洗脱时,60℃温育可提高洗脱效率。3. 若质粒提取含量低,可增加菌液量或使用ArtMedia Plasmid Culture,其质粒含量高于LB培养基。4. 确保菌体完全悬浮,未悬浮的菌体团块会导致溶液Ⅱ处理不彻底,进而成为蛋白质残留的主要来源。5. 加入溶液Ⅱ后,体系应迅速变得清澈,表明立即进行中和处理。6. ...
质粒提取各溶液组分的作用溶液1的作用是裂菌,其中的葡萄糖的作用是使溶液的黏度增加,减少剧烈摇晃时对DNA的机械剪切力。溶液2的作用是使基因组DNA以及质粒DNA变性。溶液3是使核酸复性,由于基因组DNA较大较松散,在加入复性溶液后不能充分复性,而质粒DNA比较紧密,加入复性溶液后可以充分复性,从而导致两者的沉降系数不同,经过...
质粒提取中每一步的作用溶液一:重悬菌体,提供缓冲环境。溶液二:氢氧化钠和SDS裂解菌体细胞壁、在细胞膜上穿孔,释放细胞内的质粒。溶液三:中和氢氧化钠、SDS中的钠被钾替换,吸附菌体产生沉淀。复杂的说:让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应,首先要控制好溶液的pH,因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-Cl溶液,是再自然不过的了...
提取质粒时有用到溶液1、溶液2、溶液3,分别是什么啊溶液1:50mmol/L 葡萄糖、10mmol/L EDTA、25mmol/L Tris-HCl,pH值为8.0。该溶液用于悬浮细菌,为后续的裂解步骤做准备。溶液2:0.2mol/L NaOH、1% SDS。该溶液被称为裂解液,用于裂解细菌细胞,从而释放质粒。注意,这一步骤应在5分钟内完成,以防止过度降解DNA。溶液3:3mol/L 醋酸钾、2...