RACE发展简史

发布网友发布时间：2024-10-21 20:47

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热心网友时间：2024-10-22 04:00

RACE技术发展至今，已成为一种高效快速的基因末端扩增方法。它以其简单、快速、成本低廉等优势，受到生物科研界的广泛重视。经典的RACE技术由Frohman等在1988年提出，通过RT-PCR技术，利用已知部分cDNA序列来获取完整cDNA的5'和3'端，包括单边PCR和锚定PCR。自提出以来，该技术经过不断改进和完善，克服了早期技术中步骤繁琐、耗时较长、特异性差的缺点。改进主要集中在引物设计和RT-PCR技术上，包括利用锁定引物合成第一链cDNA、在5'端加尾时采用poly(C)、选择RNase H-MMLV反转录酶或嗜热DNA聚合酶在高温条件下逆转录mRNA，以及采用热启动PCR和降落PCR提高PCR反应的特异性。

随着技术的完善，RACE技术的产品和试剂盒已实现商业化，如CLONTECH的MarathoTM技术和SMART TM RACE技术。邢桂春等在2001年使用上述两种盒进行RACE反应，发现使用Marathon TM所得到的片段总是比使用SMART TM RACE盒得到的片段短。原因在于Marathon TM技术的逆转录反应往往不能真正达到mRNA的5'末端。因此，进行RACE反应时，优选SMART TM RACE盒。

以国内目前应用最广泛的SMART TM 3'RACE为例，其原理是利用mRNA的3'末端poly(A)尾巴作为引物结合位点，以连有SMART寡核苷酸序列通用接头引物的Oligo(dT)30MN作为锁定引物，反转录合成标准第一链cDNA。然后使用基因特异性引物GSP1作为上游引物，以及含有部分接头序列的通用引物UPM作为下游引物，以cDNA第一链为模板进行PCR循环，将目的基因3'末端的DN*段扩增出来。SMART TM 3'RACE技术的这一过程，充分展示了RACE技术在基因研究中的高效性和实用性。