求助：细胞膜蛋白免疫荧光染色问题

发布网友发布时间：2022-04-21 10:37

共2个回答

热心网友时间：2023-07-15 05:21

免疫荧光染不上色的原因可能有以下几种：
1. 样品处理不当，如未正确去除细胞外的蛋白质、细胞壁等物质，或者样品处理时间过长或温度过高导致细胞结构破坏。
2. 抗体质量不佳，如抗体纯度不够、亲和力不够强、特异性不够好等。
3. 一抗质量低，如抗体已过期或受到污染。
4. 一抗浓度低。
5. 抗原流失或含量不足。
6. 洗涤不充分，如未正确进行二抗洗涤。
7. 漂洗时间过长或过短。
8. DAPI染料浓度低或过期。
9. 细胞固定不充分，如固定时间过短或使用的固定剂不适合。
请根据您的情况进行排查。

热心网友时间：2023-07-15 05:21

1,检查抗体是否过期,保存方法是否正确,稀释比例是否正确.
2,抗体的孵育时间、温度是否正确.
3,洗涤液中是否含有triton-100等破膜物质.
4,洗涤时间是否过长.
5,排除所有人为因素,考虑该细胞可能确实不表达该蛋白.