详解蛋白质免疫印迹(Western Blot )的主要步骤

发布网友发布时间：2024-09-24 18:40

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热心网友时间：2024-09-24 19:40

蛋白质免疫印迹（Western Blot）是一种关键的生物技术，用于在特定组织样本中寻找特定蛋白质。其基本步骤分为样品制备、SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）、蛋白质转移、抗体应用和检测等部分。

首先，样品制备是基础，需要通过裂解细胞和组织以释放目标蛋白质。EMD提供了多种高质量的ProteoExtract Kits，如线粒体、亚细胞蛋白质组提取等，以确保高效提取。在处理过程中，应使用蛋白酶和磷酸酶抑制剂来控制反应速率，详情请参阅Western blot页面。

接下来是SDS-PAGE步骤，用于分离蛋白质，基于分子量大小。使用Trail Mix Protein Marker进行校准，凝胶染色后，确认蛋白质均匀迁移。运行凝胶时，推荐使用EMD的OmniPur化学品系列的1X Tris-甘氨酸缓冲液。

蛋白质转移环节，通过电场将凝胶中的蛋白质转移到硝酸纤维素或PVDF膜上。这之后，膜需要被阻断以准备与抗体反应。EMD提供各类抗体，包括100%无风险保证，满足各种物种特异性需求。

最后，通过HRP二抗和ECL检测系统（如RapidStep）进行信号放大，其优点在于操作简便，灵敏度高且发光持久。显影后，通过X光胶片记录检测结果。