多糖分离纯化—离子交换层析和柱层析
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发布时间:2024-09-06 01:43
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时间:2024-11-15 22:25
多糖,与蛋白质一样,对生命过程起着关键作用,其复杂结构直接决定了其特性和功能。要深入理解多糖,分离纯化步骤至关重要。其中,离子交换层析和凝胶层析是常用的手段。
离子交换层析在多糖纯化中应用广泛,其根据多糖特性,选择合适的阳离子、阴离子或硼砂交换剂,如DEAE cellulose、DEAE Sephadex(葡聚糖)、DEAE Sepharose(琼脂糖)系列。以DEAE cellulose-52为例,它作为阴离子交换柱,其填料二乙氨乙基纤维素带有正电荷,能有效分离中性和酸性多糖,如果胶,通过盐溶液洗脱,中性糖先被洗脱,阴离子多糖随后。通过检测洗脱液糖含量,形成洗脱曲线,实现不同多糖的分离。
相比之下,凝胶层析则侧重于分子量的分离。其原理是利用分子筛特性,大分子先流出,小分子后流出,如Sephadex G系列填料,如G-15、G-25用于寡糖分离,G-100和G-200则适用于大分子多糖。通过观察洗脱曲线,可以精确收集不同分子量的样品。