酶联免疫吸附试验用于标记的酶
发布网友
发布时间：2024-09-09 15:39
共1个回答
热心网友
时间：2024-09-25 23:26
酶联免疫吸附试验（ELISA）中，用于标记抗体或抗抗体的酶需具备一系列关键特性，包括高度活性、室温稳定性、反应产物易于观察和商业化生产的可能性。常见的标记酶包括辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶和葡萄糖氧化酶，其中HRP的应用最为广泛。
HRP，即辣根过氧化物酶，主要存在于植物中，尤其在辣根中的含量最高。这是一种由无色酶蛋白和铁卟啉组成的糖蛋白（含糖18%），分子量约为40,000，由约300个氨基酸构成。它的等电点在pH 3-9之间，最适催化pH值因供氢体差异而略有变化，通常在pH 5左右。这种酶能溶于水和50%以下的硫酸铵溶液。酶蛋白和辅基的吸光特性分别在275nm和403nm处达到最大。
酶的纯度通过RZ值衡量，纯酶的RZ值通常大于3.0，最高可达3.4。RZ值低于0.6的酶制品被视为粗酶，其中非酶蛋白占比高达75%，不适合标记。RZ值在2.5以上才适合进行标记。HRP常用的底物包括邻苯二胺（OPD）、联大茴香胺（OD）、5-氨基水杨酸（5-AS）和邻联甲苯胺（OT）。OPD产生的橙色产物在490nm处有最大吸收，反应容易观察并能快速终止，是ELISA中最常用的一种。
碱性磷酸酶则从牛肠粘膜和大肠杆菌中提取，由多个同工酶组成。其底物种类丰富，如硝基苯磷酸盐，无毒且价格低廉。酶解产物为黄色，溶于水，最大吸光值在400nm。酶活性的单位定义为在pH10的反应系统中，37℃下1分钟水解1μg磷酸苯二钠的数量。
扩展资料
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后者用于测定特异抗体。
