胚胎干细胞各类分离的ES细胞
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发布时间：2024-09-08 01:13
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时间：2024-09-08 01:35
小鼠ES细胞的分离方法基本成熟，广泛应用于生命科学研究。Evans于1981年首次分离得到小鼠ES细胞，通过手术切除受精后2.5d小鼠卵巢并结合激素注射干扰子宫环境，使胚胎延迟着床，回收胚胎并体外培养于STO细胞饲养层上，得到了小鼠ES细胞系。Martin G R以免疫外科法剥离小鼠囊胚滋养层细胞，得到内细胞团并置于STO细胞饲养层上，培养基为小鼠PSA-1 ES细胞条件培养基，也得到了小鼠ES细胞。后来，Axelord等用微滴法得到小鼠ES细胞系；Kaufman等用单倍体延迟着床小鼠囊胚建立同源二倍体ES细胞系；Wobus等首次用原代小鼠成纤维细胞作饲养层建立了小鼠ES细胞系；Smith等首次使用大鼠肝细胞条件培养基作为分化抑制物建立了小鼠ES细胞系。Brook F A等进一步完善了小鼠ES细胞的分离方法，使得从许多品系小鼠包括近交系和突变系，都可获得ES细胞。
体细胞核移植分离小鼠ES细胞并非只能从囊胚，也并非必须依赖饲养层细胞。Dhhaise等将52枚8-细胞小鼠胚胎消化成单个分裂球并培养于小鼠原代成纤维细胞饲养层上，所用培养基为DMEM/F12，并添加100 mL/L的胎牛血清、100 mL/L的新生犊牛血清和0.1 mmol/L的2-巯基乙醇，5天后，出现多个干细胞集落，消化传代后建立了一个ES细胞系MSB1。MSB1注入SCID小鼠能产生包含三胚层分化物的畸胎瘤，注入囊胚产生了2个活的个体，但雄性个体无生殖能力。Tojo等用同样方法从杂交小鼠8-细胞胚也得到了ES细胞。小鼠ES细胞具有无限增殖的自我更新能力，传250代以上没有出现转化的迹象，仍具有正常的二倍体核型，能在生殖系嵌合体中产生正常的配子，作为核供体能重组克隆胚胎，表明小鼠ES细胞是永生性的。
大鼠ES细胞的分离方法与小鼠ES细胞有所不同。Iannaccone P M等从大鼠PVG近交系分离克隆大鼠ES细胞系-RESC-01，该细胞系对SSEA-1和AKP呈阳性，在大鼠胎儿成纤维细胞饲养层上能很好的增殖，在体内环境能分化形成多种细胞类型。RESC-01细胞系在体外悬浮培养时形成的胚体出现有节律的收缩运动，将其注入囊胚并移植假孕母鼠能生成嵌合体。Kawase等也利用大鼠胎儿成纤维细胞做饲养层，从DA大鼠品系分离建立了RES-DA1ES细胞系，它与小鼠ES细胞形态相似，表达AKP和4C9抗原。Brenin等也用不同的方法分离得到了ES细胞。Sun等以大鼠ES细胞为核供体，得到了核移植后代。Vassilieva等发现大鼠ES细胞表达SSEA-1、Oct-4和IL-6等细胞标记。
猪ES细胞的分离方法与牛ES细胞类似，Saito等在加有LIF的培养基中对猪ICM进行培养，分离得到猪ES细胞并进行传代。Stice S L等报道，以猪ES细胞为核供体建立的重组胚在移植受体后虽然会出现妊娠现象，但妊娠时间不超过60天，主要是因为胎盘畸形发育。若将重组胚与正常8-细胞胚嵌合，则该嵌合胚可发育至85天，胎儿同样缺乏子叶，DNA分析证实50%的嵌合体胎儿组织来源于ES细胞。
牛ES细胞的分离方法也与猪ES细胞相似，Sims等使用与一般ES细胞分离完全不同的低密度培养法，得到了15个ES细胞系。Cibelli等由49枚7日龄牛胚胎ICM分离到27个ES细胞系，用注射法将β-半乳糖苷酶基因导入ES细胞，选择转染的ES细胞注入8-细胞～16-细胞牛胚，得到了12个胎儿。对胎儿进行检测，证明ES细胞参与了生殖系嵌合。
羊ES细胞的分离方法与小鼠ES细胞相似，Handyside等以绵羊皮肤成纤维细胞和胎儿成纤维细胞作饲养层，从7日龄～8日龄绵羊囊胚分离类ES细胞，结果得到内胚层样细胞而无ES细胞出现。Tillmann等用胎牛肝成纤维细胞作饲养层分离得到传至20代的绵羊类ES细胞和40代的山羊类ES细胞。
兔ES细胞的分离方法与小鼠ES细胞相似，Graves K H等从兔子附植前囊胚分离得到ES细胞，并进行了初步鉴定，证明它们具有在饲养层上保持未分化状态的增殖能力。之后，Niemann等以PMEF为饲养层，建立了9个兔ES细胞系。Schoonjans L等将兔ES细胞注入囊胚获得了包括生殖系在内的嵌合体兔子。
扩展资料
胚胎干细胞（embryonic stem cell，ESCs，简称ES或EK细胞。）胚胎干细胞是早期胚胎（原肠胚期之前）或原始性腺中分离出来的一类细胞，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境，ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。胚胎干细胞研究在美国一直是一个颇具争议的领域，支持者认为这项研究有助于根治很多疑难杂症，是一种挽救生命的慈善行为，是科学进步的表现。而反对者则认为，进行胚胎干细胞研究就必须破坏胚胎，而胚胎是人尚未成形时在子宫的生命形式。
