来看,技术大咖深度揭密(WB替代)PRM技术
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发布时间：2024-09-07 08:18
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热心网友
时间：2024-09-28 09:26
本篇内容深入浅出，旨在揭开PRM技术的神秘面纱。以下是技术专家的详细解答，涵盖PRM内标选择与定量方法、是否需与WB验证、定量所需肽段数量、适用范围、参数优化、新肽段鉴定、内参选择、病毒感染机制分析、灵敏度与效率比较、跨膜蛋白定量、成熟蛋白比对、建库方法、蛋白质验证数量、内标选择、样本预处理、膜蛋白与核蛋白检测、低含量蛋白检测、序列差异区分、样本选择与活动推荐。
1. PRM内标如何选择？如何实现定量？skyline软件是否可以导出所有结果？除了Skyline，还有哪些软件支持PRM？
鹿明生物使用商业化iRT标准肽段作为内标，用于校正保留时间，并通过峰面积积分cv评估定量准确性。skyline软件支持所有峰图和定量数据导出，Biognosys的SpectroDive软件也可用于PRM分析。
2. PRM验证是否需要WB验证？
PRM和WB原理不同，各自有优势。对于大量蛋白，WB成本高，PRM更高效。若缩小目标蛋白范围，通过WB验证可增强研究的可靠性。
3. 只使用PRM验证是否可行？需要结合其他验证方法吗？
使用一种验证方式是合理的，多方法验证更全面。
4. 定量一个蛋白一般选择几个肽段？
通常选择2-3条独特肽段，满足无漏切、无修饰，且信号强度稳定。
5. N-糖基化蛋白组学中，PRM验证是否适用？
部分文献报告了应用，但N-糖基化修饰的不稳定性限制了广泛应用。
6. PRM是否需要对每个肽段进行参数优化？
无需优化，质谱仪器已成熟，参数固定。
7. 鉴定新多肽与相互作用蛋白或核酸？
PRM确认新多肽存在，相互作用蛋白需通过免疫共沉淀等实验。
8. 使用PRM比较不同组蛋白表达量？
比较相对信号强度，可选择管家蛋白作为内参。
9. PRM在病毒机制研究中的应用？
应用了PRM技术的文献可参考，项目需求可咨询鹿明生物专业工程师。
10. PRM在灵敏度与效率上的优势？
PRM灵敏度高，效率好，质谱仪器技术成熟，扫描速度快。
11. 跨膜蛋白定量？
分别找到序列独特的酶切肽段，可分别定量。
12. 分辨成熟蛋白与前体比例？
通过酶切后的氨基酸序列变化进行定量。
13. 馏分建库？
通常分10馏分，DIA建库后PRM可直接使用。
14. 最多选择多少个蛋白验证？
建议40个左右。
15. 使用iRT内标？不使用同位素标记？
仅做相对定量，同位素标记可实现绝对定量。
16. 不做预分的样本检测？
已预分建库，直接进行PRM扫描。
17. 膜蛋白与核蛋白检测？
PRM技术适用于所有蛋白，亚细胞定位不影响。
18. 低含量蛋白检测？
如果浓度低于检测限，可能无法检测。
19. 序列差异区分？
序列差异包含独特肽段，可区分。
20. 需要重新送样？
根据实验目的选择，验证前蛋白质组学结果或生物学验证。
总结，PRM技术在蛋白验证中展现出了强大的潜力，为分子生物学研究提供了新的工具。通过深入理解技术细节与应用策略，研究者可以更有效地利用PRM技术，推动科研成果的创新与发展。
热心网友
时间：2024-09-28 09:29
本篇内容深入浅出，旨在揭开PRM技术的神秘面纱。以下是技术专家的详细解答，涵盖PRM内标选择与定量方法、是否需与WB验证、定量所需肽段数量、适用范围、参数优化、新肽段鉴定、内参选择、病毒感染机制分析、灵敏度与效率比较、跨膜蛋白定量、成熟蛋白比对、建库方法、蛋白质验证数量、内标选择、样本预处理、膜蛋白与核蛋白检测、低含量蛋白检测、序列差异区分、样本选择与活动推荐。
1. PRM内标如何选择？如何实现定量？skyline软件是否可以导出所有结果？除了Skyline，还有哪些软件支持PRM？
鹿明生物使用商业化iRT标准肽段作为内标，用于校正保留时间，并通过峰面积积分cv评估定量准确性。skyline软件支持所有峰图和定量数据导出，Biognosys的SpectroDive软件也可用于PRM分析。
2. PRM验证是否需要WB验证？
PRM和WB原理不同，各自有优势。对于大量蛋白，WB成本高，PRM更高效。若缩小目标蛋白范围，通过WB验证可增强研究的可靠性。
3. 只使用PRM验证是否可行？需要结合其他验证方法吗？
使用一种验证方式是合理的，多方法验证更全面。
4. 定量一个蛋白一般选择几个肽段？
通常选择2-3条独特肽段，满足无漏切、无修饰，且信号强度稳定。
5. N-糖基化蛋白组学中，PRM验证是否适用？
部分文献报告了应用，但N-糖基化修饰的不稳定性限制了广泛应用。
6. PRM是否需要对每个肽段进行参数优化？
无需优化，质谱仪器已成熟，参数固定。
7. 鉴定新多肽与相互作用蛋白或核酸？
PRM确认新多肽存在，相互作用蛋白需通过免疫共沉淀等实验。
8. 使用PRM比较不同组蛋白表达量？
比较相对信号强度，可选择管家蛋白作为内参。
9. PRM在病毒机制研究中的应用？
应用了PRM技术的文献可参考，项目需求可咨询鹿明生物专业工程师。
10. PRM在灵敏度与效率上的优势？
PRM灵敏度高，效率好，质谱仪器技术成熟，扫描速度快。
11. 跨膜蛋白定量？
分别找到序列独特的酶切肽段，可分别定量。
12. 分辨成熟蛋白与前体比例？
通过酶切后的氨基酸序列变化进行定量。
13. 馏分建库？
通常分10馏分，DIA建库后PRM可直接使用。
14. 最多选择多少个蛋白验证？
建议40个左右。
15. 使用iRT内标？不使用同位素标记？
仅做相对定量，同位素标记可实现绝对定量。
16. 不做预分的样本检测？
已预分建库，直接进行PRM扫描。
17. 膜蛋白与核蛋白检测？
PRM技术适用于所有蛋白，亚细胞定位不影响。
18. 低含量蛋白检测？
如果浓度低于检测限，可能无法检测。
19. 序列差异区分？
序列差异包含独特肽段，可区分。
20. 需要重新送样？
根据实验目的选择，验证前蛋白质组学结果或生物学验证。
总结，PRM技术在蛋白验证中展现出了强大的潜力，为分子生物学研究提供了新的工具。通过深入理解技术细节与应用策略，研究者可以更有效地利用PRM技术，推动科研成果的创新与发展。
