谁有大肠杆菌生成胰岛素的示意图啊?
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发布时间：2022-05-10 01:59
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热心网友
时间：2023-10-18 12:07
1、获取人胰岛素基因片段（获取外源基因）
有多种方法呢。鸟*法（用一大堆*性核酸内切酶对附近基因进行剪切，再提取所需要的。至于如何筛选，用DNA分子杂交，即DNA探针），人工合成法（根据转录蛋白或者mRNA推导出基因序列，然后人工合成，没有内含子），还有从基因文库中提取（也就是事先已经提取完毕的拿来用），以及PCR扩增技术（用于大量生产该段基因片段，用于商业化运作……）
2、将获得的人胰岛素基因片段与质粒结合（与运载体结合）
先得用同样的*性核酸内切酶处理质粒，产生和人胰岛素基因片段相同的黏性末端（也可能是平末端），然后将两DNA分子用DNA连接酶结合在一起。关于运载体，首先需要有多处*酶切点，然后还需要有一段标记基因，最后需要有能在受体细胞内稳定存在、自我复制并表达的能力。大肠杆菌内含质粒（独立于细菌本身的DNA，存在于细胞质内的小型环状DNA分子），且满足以上条件。
3、将质粒导入受体细胞
即将组装好的质粒导入大肠杆菌体内。
4、检测基因是否表达
即检测是否有人的胰岛素表达出来。方法基本有三种：DNA分子杂交，RNA分子杂交，蛋白质检测（抗原抗体特异性结合）。大肠杆菌会表达稳定存在于质粒上的基因片段，依据的是中心法则：DNA——〉RNA——〉蛋白质。首先质粒上的片段解旋，RNA聚合酶嵌入启动子，然后开始合成mRNA，直到终止子。接下来运输至核糖体，有tRNA附带氨基酸随之而来，依据密码子（mRNA上）和反密码子（tRNA上）配对，固定下指定的氨基酸片段，然后脱水缩合成为多肽，继续于内质网中加工成成熟的人的胰岛素蛋白。
