详解修饰引物/探针—TaqMan探针

发布网友发布时间：2024-10-13 08:28

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热心网友时间：2024-10-13 08:36

1996年，Heid融合了Taq酶的热稳定性和5'核酸外切酶活性，以及荧光共振能量转移探针的原理，创造了TaqMan探针技术，用于实时荧光定量PCR（qPCR）的高效检测方法。TaqMan探针本质上是带有荧光染料（报告基团）和淬灭基团的FRET寡核苷酸，5'端发出荧光，3'端则能吸收这部分荧光。

在qPCR过程中，Taq酶的外切酶活性会逐渐降解探针，使得荧光基团与淬灭基团分离，每扩增一次DNA，荧光信号增加。实时荧光PCR仪通过监测这种荧光变化，计算出Ct值，Ct值越小，说明样本中的目标序列越多。TaqMan探针法在科研、医药卫生和基因检测中广泛应用，如微生物检测、病毒检测、基因鉴定、癌症早期检测等。

TaqMan探针法的优点在于特异性高，仅当模板完全匹配时才会产生荧光信号，确保结果准确。其准确性、灵敏度优于传统染料法，尤其对于低拷贝样本。此外，探针法可同时检测多个目标，通过设计不同荧光标记实现多重检测，提高了效率。

设计TaqMan探针时需考虑长度（15~30 bp）、Tm值（68~72°C）、5'端与3'端的特性、碱基分布（30%~80% GC含量）、结合位置以及纯化方式。存储时务必避免光照，确保荧光基团稳定性。探针配制和分装后，应按需稀释并冷藏保存，以延长其使用寿命。