RT-PCR技术简介

发布网友发布时间：2024-10-03 19:57

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热心网友时间：2024-12-12 02:53

RT-PCR技术，全称为Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，是一种结合了逆转录（RT）和cDNA聚合酶链式扩增反应的高效技术。它的核心过程是首先通过逆转录酶将RNA转化为互补的cDNA，然后利用cDNA作为模板进行扩增，以获得特定的基因片段。

RT-PCR以其高灵敏度和广泛的应用性而著称，主要应用包括评估细胞或组织中基因表达的水平，检测细胞内RNA病毒的数量，以及直接克隆特定基因的cDNA序列。实验中，可以选用不同类型的模板RNA，如总RNA、mRNA或体外转录的RNA产物，但确保样本无RNA酶和基因组DNA污染至关重要。

在反转录过程中，选择引物可以根据实验需求，随机引物、Oligo dT引物或者基因特异性引物皆可选用。对于真核细胞mRNA，尤其是那些结构简单的短片段，这三种方法都能适用。