培养基配好后为什么必须立即灭菌 如何检查灭菌后的培养基是否为无菌
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发布时间：2024-10-02 14:26
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时间：2024-10-06 20:45
培养基刚配好时，因为暴露在环境中，容易被环境中的细菌污染。这些细菌会利用培养基作为生长介质，一旦繁殖起来，会消耗培养基中的营养成分，甚至产生有害物质，导致培养基无法使用。因此，必须立即进行灭菌处理。
二、如何检查灭菌后的培养基是否为无菌
灭菌后，要确保培养基无菌，可以通过无菌试验来检查。具体方法是：将灭菌后的菌棒置于25-28℃恒温环境中避光培养3天，观察袋内是否有杂菌滋生的痕迹，是否有变色或斑点出现。如果有上述现象，则说明灭菌不彻底。
三、影响培养基灭菌效果的因素有哪些
培养基的灭菌效果受多种因素影响：
1、营养成分的保持
湿热灭菌过程中，微生物被杀灭的同时，培养基的营养成分也会受到一定程度的破坏，尤其是氨基酸和维生素。例如，在121℃下，仅20分钟，赖氨酸和精氨酸等碱性氨基酸就会有59%被破坏，蛋氨酸和色氨酸也会有相当数量被破坏。某些营养成分在热的作用下还会发生反应，影响培养基质量。
2、微生物的耐热性
细菌芽孢的热抵抗力较强，灭菌所需时间取决于减少细菌芽孢的数量。芽孢数量越少，灭菌所需时间越短。
3、pH值
pH值对微生物的耐热性有很大影响。当pH值在6.0-8.0之间时，微生物最不易死亡。pH值小于6.0时，微生物较易死亡，因为此时H+更容易渗入微生物细胞，改变其生理反应，促使死亡。因此，培养基的pH值越低，灭菌所需时间越短。
4、培养基成分
高浓度的有机物，如油脂、糖类及蛋白质等，会形成一层薄膜包裹细胞，影响热的传导。高浓度的盐类和色素则会削弱细胞的耐热性，使得灭菌更容易。例如，大肠杆菌在水中加热至60-65℃便会死亡，在10%糖液中需70℃加热4-6分钟才死亡，在30%糖液中则需30分钟。一般情况下，糖类含量较多时，建议选择115℃，30分钟；而一般的培养基则可选择121℃，20分钟。
5、泡沫
泡沫中的空气会形成隔热层，阻碍热量穿透，使得其中的杂菌难以被杀死。
6、颗粒
颗粒大小会影响灭菌效果。小颗粒容易灭菌，大颗粒则难以灭菌。含有少量较大颗粒及粗纤维的培养基可通过粗滤去除（不影响培养基质量），以确保灭菌彻底。
7、灭菌锅内空气是否排净
灭菌锅内空气未完全排出，会影响灭菌温度和压力的比例关系。即便达到了相同的压力，若空气未排净，即非纯蒸汽灭菌，实际温度可能达不到预期，从而影响灭菌效果。
