单克隆抗体鉴定实验
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发布时间:1天前
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时间:2024-10-03 22:23
在单克隆抗体鉴定实验中,首先对杂交瘤细胞的染色体进行检查,通常采用秋水仙素裂解法。制备完成的单克隆抗体需要进一步测定其类型和亚型。这一过程涉及购买特定的标准抗血清,如兔抗小鼠Ig类型和亚型的,常用的检测方法包括琼脂扩散法和ELISA夹心法。
ELISA夹心法是常用的一种测定方法,它基于双抗体夹心原理。通过小鼠抗体的二抗包被微孔板,与单克隆抗体进行结合,然后加入HRP标记的抗小鼠Ig类、亚类抗体进行反应。显色后,通过TMB底物系统和酶标仪测定吸光度,判断单克隆抗体的类别或亚型。该试剂盒具有高分辨率,是鉴定小鼠单克隆抗体类和亚类的可靠工具。
实验步骤包括恢复试剂至室温,配置清洗液,准备样本和阳性对照,加入细胞培养上清或纯化的抗体进行孵育。随后进行多次洗涤,加入酶标二抗和显色剂进行进一步反应,肉眼观察或借助酶标仪测量结果。该试剂盒具有高灵敏度和特异性,结果判定直观。
单克隆抗体的特异性鉴定可以通过多种技术,如免疫荧光法、ELISA法、间接血凝和免疫印迹技术,以及免疫阻断试验来确保其特异性。效价测定方面,可采用凝集反应、ELISA或放射免疫测定,腹水样本的效价通常高于培养上清。亲和力和识别抗原表位的能力也是单抗鉴定的重要指标。
扩展资料动物脾脏有上百万种不同的B淋巴细胞系,具有不同基因不同的B淋巴细胞合成不同的抗体。当机体受抗原刺激时,抗原分子上的许多决定簇分别激活各个具有不同基因的B细胞。被激活的B细胞*增殖形成效应B细胞(浆细胞)和记忆B细胞,大量的浆细胞克隆合成和分泌大量的抗体分子分布到血液、体液中。如果能选出一个制造一种专一抗体的浆细胞进行培养,就可得到由单细胞经*增殖而形成细胞群,即单克隆。单克隆细胞将合成针对一种抗原决定簇的抗体,称为单克隆抗体。
单克隆抗体鉴定实验
在单克隆抗体鉴定实验中,首先对杂交瘤细胞的染色体进行检查,通常采用秋水仙素裂解法。制备完成的单克隆抗体需要进一步测定其类型和亚型。这一过程涉及购买特定的标准抗血清,如兔抗小鼠Ig类型和亚型的,常用的检测方法包括琼脂扩散法和ELISA夹心法。ELISA夹心法是常用的一种测定方法,它基于双抗体夹心原理。...
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检测阳性,就是能产生特定抗体的杂交瘤细胞。杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞,只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞,因此,必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交...
单克隆抗体
通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法,筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞,并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后,及时进行冻存。5.单克隆抗体的大量制备单克隆抗体的...
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