SDS-PAGE电泳及Western试剂配制protocol
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发布时间：2024-10-02 18:39
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时间：2024-10-17 16:38
为了SDS-PAGE电泳和Western实验的顺利进行，需要精确配制一系列试剂。以下为所需试剂的具体配制方法：
首先，需准备1.5 mol/L Tris (PH8.8)溶液。在1L烧杯中称量181.7g Tris，加入约800 ml去离子水并充分搅拌以溶解。然后用浓盐酸调节pH值至8.8，注意溶液需冷却至室温再调定pH值，避免温度变化对pH值的影响。定容至1L后，进行高压灭菌并室温保存。
接着，配制1 mol/L Tris (PH6.8)溶液。称量121.1gTris，加入约800 ml去离子水充分搅拌溶解。按照所需pH值添加浓盐酸调节，并定容至1L。同样需在溶液冷却至室温后再调定pH值，避免温度对pH值的影响。如溶液呈现*，需更换质量更好的Tris。
配制丙烯酰胺溶液。在烧杯中称量所需试剂，并加入约60 ml去离子水充分搅拌溶解。定容至100 ml后，使用0.45 µm滤膜过滤杂质，于棕色瓶中4 oC保存。注意丙烯酰胺具有神经毒性，操作时应戴手套等防护措施。聚丙烯酰胺无毒，但需谨慎操作，防止含有未聚合成分。
配制30％SDS溶液。称量10 g高纯度SDS置于烧杯中，加入约800 ml去离子水加热溶解。滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2，定容至100 ml并室温保存。
准备10％过硫酸铵溶液。称量1 g过硫酸铵，加入约10 ml去离子水搅拌溶解。存储于4 oC，其有效期约为两周左右。
制作不含DTT的1×SDS凝胶加样缓冲液，室温保存并临用前加入DTT。
配制Takara公司Catalog-N5上的5×SDS-PAGE Loading Buffer。按照配方称量所需试剂于10ml塑料离心管中，溶解后定容至5 ml。小份分装后于室温保存，使用前加入25 ul的2-ME，以延长保存时间。
配制1 mol/L DTT溶液，加入20 ml的0.01 M NaOAc (pH5.2)，溶解后使用0.22μm滤器过滤除菌，保存于-20oC。
配制3 M醋酸钠（NaOAc）溶液。称取40.8 gNaOAc·3H2O于烧杯中，加入约40ml去离子水搅拌溶解，加冰醋酸调节pH值至5.2，定容至100 ml后高压灭菌并室温保存。
制备5×Tris-Glycine Buffer（SDS-PAGE电泳缓冲液）。称量所需试剂置于烧杯中，加入约900 ml去离子水搅拌溶解，定容至1L后室温保存。
制备Transfer Buffer（转膜缓冲液）。先配制1M Tris base，再加入适量甘氨酸、甲醇与水，调至合适pH值。置于4oC保存备用。
准备丽春红S储存液（10×），用于染色实验。具体操作为按照一定比例稀释储存液与去离子水，即成丽春红S使用液。
此外，还需根据实验需求制备多种缓冲液，如10X TBS、Wash Buffer TBS/T、Blocking Buffer、Primary Antibody Dilution Buffer等，具体配制方法参照相关实验手册或专业文献。
以上步骤详细介绍了SDS-PAGE电泳及Western实验中所需试剂的配制方法，确保了实验的准确性和有效性。
SDS-PAGE电泳及Western试剂配制protocol
配制3 M醋酸钠（NaOAc）溶液。称取40.8 gNaOAc·3H2O于烧杯中，加入约40ml去离子水搅拌溶解，加冰醋酸调节pH值至5.2，定容至100 ml后高压灭菌并室温保存。制备5×Tris-Glycine Buffer（SDS-PAGE电泳缓冲液）。称量所需试剂置于烧杯中，加入约900 ml去离子水搅拌溶解，定容至1L后室温保存。制备Transf...
跑SDS-PAGE的电泳缓冲液需要什么水来配制
1.配制电泳试剂用水蒸馏水就可以了就是单蒸水,如果条件允许的话,可以只用更好的当然纯水是最好了;2.一般实验室都会有蒸馏水,双蒸水,其实双蒸水就能满足大多数实验室的要求,纯水才是所谓的去离子水
有人有western blot的Tris-乙酸胶的配方吗?还有相关电泳液的配方?急...
2g)SDS溶于去离子水中，定容至100mL(20mL)，加热至68℃助溶。E液——10％过硫酸铵：5g(0.5g)过硫酸铵，溶于50mL(5mL)去离子水中；现配现用或分装至0.5mL离心管中冷冻备用。F液——TEMED(N-N-N`-N`－四甲基乙二胺)原液，室温保存。三、配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶...
求western blot 电泳液和转膜缓冲液的配方~~谢谢啦~~ 有的转移缓冲液加...
5*SDS-PAGE电泳缓冲液 0.125M tris 15.1g, 1.25M glycine 94g,0.5% SDS 5.0g,加入800ml去离子水，搅拌溶解。加去离子水将溶液定容至1L后，室温保存。用的时候稀释成1*的就可以了。转膜缓冲液的配制方法：39mM glycine 2.9g,48mM tris 5.8g, SDS 0.37g 加入600ml去离子水，充分搅拌溶...
sds-page凝胶电泳怎么制备
SDS-PAGE电泳可用于分离蛋白质和核苷酸 ，这里综述了SDS-PAGE实验原理、试剂和器材、以及实验操作步骤。一.实验原理：SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。该法是依据混合蛋白的分子 量不同来进行分离的。SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏...
western-blot实验步骤
1.收集蛋白样品(Protein sample preparation)使用细胞裂解液，对贴壁细胞、悬浮细胞或组织样品进行裂解。然后测定每个蛋白样品的蛋白浓度。2. 电泳(Electrophoresis)(1) SDS-PAGE凝胶配制 SDS-PAGE凝胶（分离胶及浓缩胶）可以参考一些文献资料进行配制 (2) 样品处理 在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE...
SDS-PAGE分离胶-浓缩胶配方
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sds电泳上样缓冲液如何配置
配制过程：1. 量取1M Tris-HCl （pH6.8） 0.6 ml；50%的甘油5 ml；10%的SDS溶液2 ml；1%的溴酚兰1 ml；2. 加入去离子水定容至10 ml；3. 分装；4. 在4℃可保存数周，-20℃可保存数月之久。你还可以参考下面这个配方：2×SDS凝胶加样缓冲液 组分（摘自《分子克隆》第三版）Tris-...
SDS-PAGE和western-blot有区别吗
前一个只是把蛋白进行电泳分析，主要用于蛋白纯度分析及分子量分析，主要用于定性；后者则是在前者的基础上又经过了转膜及杂交等步骤，用于分析特定蛋白的表达多少的。
sds-page电泳百分之20的分离胶怎么配?
10%的分离胶：蒸馏水40.5ml；1.5Mtris 25ml（pH8.8）；10%SDS 1ml；acr/bis 33.25ml 20%的分离胶按此比例加倍即可。如果是小分子蛋白分离，建议最好用专门走小分子蛋白的胶（例如Tricine-SDS-PAGE等）
