RTPCR影响因素

发布网友发布时间：2024-10-04 20:50

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热心网友时间：2024-11-19 00:40

RT-PCR反应的成效受到多种因素的精密*，其中包括硫酸镁的浓度、引物的退火温度以及扩增循环数。

首先，对于硫酸镁的浓度，推荐在0.5至3.0毫摩尔每升（mM）范围内进行初步实验，每次调整0.5 mM，以寻求最佳反应效果。

对于引物的处理，如果引物的Tm（熔解温度）较高，可以适当提高退火和延伸阶段的温度。这种做法有助于减少非特异性的引物结合，从而提高特异性产物的产生率，提升实验的准确性。

一般来说，目标RNA在40轮的PCR反应中就能被明显检测到。然而，如果目标RNA的浓度较低，或者初始材料有限，可能需要增加扩增次数，例如提升到45至50次，以确保足够数量的目标片段被扩增出来。

每一步骤的选择都需根据具体实验条件进行，以优化RT-PCR反应的结果。