测定血清总蛋白的参考方法是
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发布时间：2022-05-08 02:20
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时间：2023-05-19 07:12
（一）凯氏定氮法
将血清与强酸一起加热消化，使血清中的含氮化合物转化为铵盐，再加碱使铵盐成为氨进经蒸馏分离出来，最后用酸滴定测定氮量，按每克氨相当于6.25g蛋白质计算蛋白质的浓度。
应用历史较久，结果较准确，是蛋白质测定的参考方法，但操作复杂，影响因素较多，且不少蛋白质的含氮量并非16%，不适用于日常工作，目前多用于标准蛋白的标定及校正其它的常规方法。
（二）双缩脲法
蛋白质中的肽键（-CONH-）在碱性条件下与Cu2+络合成紫红色复合物，产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质含量成正比。
此反应和二分子尿素缩合后的产物双缩脲（H2N-CO-NH-CO-NH2）与碱性铜溶液作用形成紫红色的反应相似，故称为双缩脲反应。几分子中含有两个甲酰胺基(-CO-NH2)的化合物都能出现此反应。
因至少含2个-CONH-基团才能与Cu2+络合，所以氨基酸和二肽无此反应。体液中小分子肽含量极低，故血浆中除蛋白质外几乎不存在可与双缩脲试剂显色的物质，且各种蛋白质显色程度基本相同。
此法简便、准确、重复性好，在10-120g／L。浓度范围内呈良好的线性关系，批内CV值<2％，但灵敏度较其它方法稍差，是目前临床上最常规的方法。
（三）酚试剂法
蛋白质分子中的酪氨酸残基和色氨酸残基能够和酚试剂中的磷钨酸-磷钼酸反应生成蓝色化合物。Lowry改良法在酚试剂中加入Cu2+，提高了呈色的灵敏度，其中75％呈色靠铜离子产生。Lowry改良法的灵敏度为双缩脲法的100倍左右。
由于各种蛋白质中酪氨酸和色氨酸的比例不同，如白蛋白含色氨酸为0.2％，而在一些球蛋白中色氨酸含量高达2％~3％，因此使用本法测定纯粹的、单一的蛋白质较合适。此法灵敏度较高，为10~60ug／ml，因而适用于测定蛋白质含量较少的标本(如脑脊液)，但试剂反应易受还原性化合物糖类、酚类及多种药物如水杨酸、氯丙嗪和某些磺胺药的干扰。
（四）紫外分光光度法
蛋白质分子内的色氨酸、酪氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白质溶液在280nm波长处有一吸收峰，依此性质可用于蛋白质定量。
由于各种蛋白质中芳香族氨基酸的含量和比例不同，血清中游离的酪氨酸和色氨酸在280nm处也有吸收，因尿酸和胆红素在280nm处也有干扰，因而本法的准确性和特异性都受到很大的影响。
此法敏感而且简便，由于制剂未经任何处理，蛋白质的生物活性得以保留，故常用于较纯的酶和免疫球蛋白的测定。但此法需紫外分光光度计和石英比色杯。
（五）染料结合法
在酸性环境中，蛋白质分子解离出的-NH3+，可与染料的阴离子产生颜色反应。常用的染料有氨基黑、考马斯亮蓝等。这一性质可用于电泳后蛋白质的染色和血清总蛋白测定。
此法操作简便、重复性好、灵敏度高、且干扰因素较少。缺点是特异性不高，分子量3 000以上的多肽也参与反应。另外，不同蛋白质和染料的结合力不一致，因此很难找到一种合适的物质作标准物，使此方法的应用受到*。
（六）比浊法
用某些酸类(如二氯醋酸、磺基水杨酸等)和血清蛋白质结合产生沉淀，然后测定其浊度，与同样处理的蛋白标准液比较，即可求得蛋白质含量。
此方法简便，不需特殊仪器。缺点是浊度形成的强弱易受多种因素影响，如加入试剂的方法、反应时的温度等。另外，蛋白质沉淀时易形成絮状物，难以获得稳定的悬浮液
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时间：2023-05-19 07:12
将血清与强酸一起加热消化,使血清中的含氮化合物转化为铵盐,再加碱使铵盐成为氨进经蒸馏分离出来,最后用酸滴定测定氮量,按每克氨相当于6.25g蛋白质计算蛋白质的浓度。
2、总蛋白检测方法:双缩脲法
蛋白质中的肽键(-CONH-)在碱性条件下与Cu2+络合成紫红色复合物,产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质含量成正比。
3、总蛋白检测方法:酚试剂法
蛋白质分子中的酪氨酸残基和色氨酸残基能够和酚试剂中的磷钨酸-磷钼酸反应生成蓝色化合物。Lowry改良法在酚试剂中加入Cu2+,提高了呈色的灵敏度,其中75%呈色靠铜离子产生。Lowry改良法的灵敏度为双缩脲法的100倍左右。
总蛋白检测方法
4、总蛋白检测方法:UV法
这种方法是在280nm波长,直接测试蛋白。选择Warburg公式,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。
5、总蛋白检测方法:BCA法
原理 BCA(bicinchonininc acid)与二价铜离子的硫酸铜等其他试剂组成的试剂混合一起即成为苹果绿,即BCA工作试剂。在碱性条件下,BCA与蛋白质结合时,蛋白质将Cu2+还原为Cu+,工作试剂由原来的苹果绿色变为紫色复合物。562nm下其光吸收强度与蛋白质浓度成正比。
BCA蛋白浓度测定试剂盒,Abbkine的蛋白质定量试剂盒(BCA法)提供一个简单,快捷,兼容去污剂的方法,准确定量总蛋白。
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时间：2023-05-19 07:13
1、凯氏定氮法是经典的蛋白质测定方法。该法结果准确性好、精密度及灵敏度高，是公认的参考方法，但操作复杂、费时。
2、双缩脲法方法简便，结果准确、快速、重复性好，为WHO和IFCC推荐方法，但灵敏度不高。
3、酚试剂法灵敏度高，达双缩脲法的100倍左右，适合测定单一蛋白质，但易受还原性化合物的干扰。
4、紫外分光光度法测定的蛋白质未加任何试剂和处理，可保留制剂的生物活性，适合较纯的酶、免疫球蛋白的测定；因受尿酸和胆红素干扰不适合血清等组成复杂的蛋白质溶液的测定。
5、染料结合法方法简便、快速、灵敏；缺点是不同蛋白质与染料的结合力不一致，且试剂对比色杯有吸附作用。 6、比浊法操作简便、灵敏度高；缺点是影响浊度大小的因素较多。
血清蛋白质是各种蛋白的复杂混合物。可利用不同的方法将其分离。血浆中的白蛋白、a1、a2、β球蛋白，纤维蛋白原，凝血酶原和其它凝血因子等均由肝细胞合成。γ球蛋白主要来自浆细胞。当肝脏发生病变时，肝细胞合成蛋白质的功能减退，血浆中蛋白质即会发生质和量的变化。临床上用各种方法检测血浆蛋白的含量来协助诊断肝脏疾患，并作为疗效观察，预后判断的指标。
小于正常值的相关疾病:长期慢性发热 、 大面积烧伤(白细胞增多)， 恶性肿瘤 、 肝癌(淋巴细胞和核细胞增多) ， 肝功能严重受损 、 肝坏死 、 肝硬化(谷丙转氨酶增多) ， 甲状腺功能亢进 、 浆膜渗出性损害 、 结核病 、 慢性腹泻 、 慢性肝炎 、 肾病综合征 、 吸收不良综合征 ， 营养不良、贫血(红细胞，红蛋白稍偏低)等。
大于正常值的相关疾病:大量出汗 、 多发性骨髓瘤 、 腹泻 、 巨球蛋白血症 、 严重呕吐、中毒等。
正常数值
参考值: 双缩脲法、微量定氮法:
新生儿 46~70g/L
7月~1周岁 51~73g/L
1~2周岁 56~75g/L
>3周岁 62~76g/L
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时间：2023-05-19 07:13
1.双缩脲法
蛋白质中的肽键在碱性溶液中能与铜离子作用产生紫红色络合物。此反应和两个尿素分子缩合后生成的双缩脲在碱性溶液中与铜离子作用形成的紫红色的反应相似，故称之为双缩脲反应。这种颜色反应强度在一定浓度范围内与蛋白质含量成正比，经与同样处理的蛋白质标准液比较，即可求得蛋白质含量。
2.微量凯氏定氮波氏显色法
血清中蛋白质及非蛋白含氮化合物经硫酸作用后变成铵医学教育网|搜集整理，后者用酚-次氯酸盐试剂显色后测定总氮。总氮减去非蛋白氮，最后换算成蛋白含量。
