怎么用酶标仪测ELASIA?

发布网友发布时间：2022-05-08 23:43

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热心网友时间：2024-01-27 16:16

作为微孔板比色计的酶标仪，其基本功能不外乎一个比色测定，所不同的是在测定波长范围、吸光度范围、光学系统、检测速度、震板功能、温度控制、定性和定量测定软件功能等方面的差异，当然全自动酶免疫分析系统还具有自动洗板、温育、加样等功能。在临床实验室实际工作中，实验人员在使用酶标仪进行测定操作时，有时难免会对酶标仪的一些性能指标产生迷惑，甚至对酶标仪的应用产生错误的理解。如诸如使用酶标仪较用肉眼观察测定的阳性率明显增加这样的问题。一、测定波长一般酶标仪的测定波长在400～750nm或800nm之间，完全可以满足ELISA的显色测定。目前国内常见的ELISA试剂盒所使用的标记用酶均为辣根过氧化物酶（HRP），底物通常为四甲基联苯胺（TMB）和邻苯二胺（OPD），其在过氧化氢溶液的存在下，经HRP作用，分别氧化为2，2，-二氨基偶氮苯（DAB）和联苯醌。当pH值为5．0左右时，DAB在450nm波长处有最大吸收，当pH值降为L 0时，最大吸收波长移至492 nm，同时摩尔消光系数变大，显色加深，因而常用强酸如硫酸或盐酸终止反应。TMB的氧化产物联苯醌在波长450nm处有最大消光系数，如果HRP量少，H：O：和TMB过量时，则形成蓝色的阳离子根。降低pH，即可使蓝色的阳离子根转变为*的联苯醌，使用硫酸作为终止剂可使产物稳定90min。因此，450nm和492 nm两个波长是目前ELISA测定最常用的。各种酶标仪都配有放置滤光片的可自动转换的部件，可以同时安装6～8片滤光片，所配备的滤光片均应包括上述两个波长，有的酶标仪以490nm滤光片替代492nm滤光片，影响不大。除了这两个基本滤光片外，考虑到双波长比色的需要，还应有620nm或630nm或650nm和405nm波长的滤光片，其他滤光片可根据自己的需要选择。有时，有的实验室希望用酶标仪作微量生化测定，故酶标仪生产厂家对其生产的酶标仪扩展了紫外检测功能，此时需要一个340 nm波长滤光片。此时，酶标仪的测定波长范围就成为340-750nm或800nm。酶标仪有单波长和双波长检测功能有时使用者不知在什么情况下使用单或双波长检测。所谓的"单波长"就是使用一种对显色具最大吸收的波长即450 nm或492 nm进行比色测定；而"双波长"则除了用对显色具最大吸收的波长即450 nm或492 nm进行比色测定外，同时用对特异显色不敏感的波长如630 nm进行测定，酶标仪最后打印出来的吸光度则为二者之差。630 nm波长下得到的吸光度是非特异的，来自于板孑L上诸如指纹、灰尘、脏物等所致的吸收。因此，在ELISA比色测定中，最好使用双波长，且不必设空白孔。二、测定的吸光度范围通常，酶标仪的吸光度测定范围在。一2．5之间即可以满足ELISA的测定要求。早期的酶标仪可测定的吸光度一般在。一2．5之间，但现在基本上都做了拓宽，可达到3．5以上，并且能保持很好的精密度与线性。因此，对于酶标仪的吸光度范围不必去刻意追求大的吸光度范围，主要要看在一定的吸光度范围内的线性和精密度如何。三、光学系统酶标仪的光学系统采用的是垂直光路多通道（通常为8或12通道，亦有单通道）检测，一般为硅光管或光导纤维，除测定通道外，有的酶标仪还有一个参比通道，每次测定可进行自我校准。酶标仪的光学系统功能如何，均可通过酶标仪测定的吸光度范围、线性度、精密度和准确度等体现出来。光学系统好的话，则上述指标也应较佳。测定的精密度与测定通道之间的均一性有直接关系。单通道可避免因通道不同所致的差异。四、检测速度酶标仪的检测速度是指其完成比色测定所需要的时间。检测速度快，有利于提高检测的精密度，即避免由于测定过程中，因测定时间不同所致的各微孔间吸光度间的差异。目前市场上常见的酶标仪检测速度都非常快，通常在数秒钟内。

热心网友时间：2024-01-27 16:16

用酶标仪测定这类实验，可以根据实际试剂说明书，来进行操作，项目试剂说明书上面有详细操作步骤，基本大体步骤为：1，加样品；2，加酶和抗体；3，封板避光温浴；4，洗板；5，加入显色剂A,B；6，封板避光继续温浴；7，加入终止液，选用特定波长进行测试。

热心网友时间：2024-01-27 16:17

1L，人家没问你酶标仪是什么，人家有说明书好吧？混分也得有点素质啊。 lz，酶标仪测定ELISA比Luciferase方便多了，因为不用加样啊... 你在96孔板上显色之后，加终止液，然后直接在机器上设好吸光度就测了，一块板1分钟就测完了。比如，你是HRP-TMB显色，就设定吸光度为450nm，shake 5秒，然后每个孔1秒，测下去就好了。
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