双酶切酶切体系和buffer怎么设计比较合适?

体系不管多大，都有相应的buffer，只要将buffer变为1X工作浓度就行了，两个同时切的话，需要注意酶的量，看单位是多少，一般是1ul的酶切1ug的质粒或者其它DNA序列，尽量酶的体积不能超过体系的10%，因为里面含有甘油，可能会影响酶切效率。

1. 同步双酶切：这种方法的优势在于节省时间和资源。关键在于选择合适的缓冲液，如NEB提供的酶附带的NEBuffer，它们能确保每种酶在100%活性下工作。理想的缓冲液需充分考虑两种酶的活性差异，尽量在《内切酶在不同缓冲液里的活性表》和酶说明书指导下使用。如果酶在非最佳条件下活性降低，可能需要调整酶...

在PCR扩增过程中，设计引物时需考虑酶切位点。选择高效且常用的限制酶，如BamHI和HindIII，同时注意不同公司酶的BUFFER配方和酶效率。引物两端加上保护碱基后，进行双酶切。建议酶切时间控制在3小时，1小时也可，使用大体系，如100微升。纯化PCR产物时，柱式纯化更为推荐，因为可以避免割胶过程中可能的...

选择能最大程度保持两种酶活性的缓冲液进行双酶切，如果非最优条件影响切割速率，可以根据具体酶的活性调整酶量和反应时间。在某些情况下，如果找不到同时适用于两种酶的缓冲液，就需要采取分步酶切。步骤是首先从对盐浓度要求较低的酶开始，完成酶切后逐渐调整盐浓度以适应第二种酶的需求，接着加入第...

你用的是哪个公司的酶？ 不同公司的buffer不一样的。不过，对于一般的体系，可以选择10微升体系或20微升体系。具体是1/10体积的buffer，酶的总体积控制在1/10以内，比如10微升体系酶量不要超过1微升，20微升体系不要超过2微升。DNA加入1~1.5微克即可。用水补足体积。

1、回收PCR产物：在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的 选择非常重要，尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶，如BamHI，HindIII，提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位点后，在各个酶的两边加上保护碱基。双酶切...

酶1 0.5ul 酶2 0.5ul buffer 去Takara产品目录查双酶切buffer表，按照那个倍数加，有时候需要BSA 水补足 20ul 30或37度，1-5小时都可以。有个别酶需要55度。注意，酶别加多了，甘油浓度过高影响酶的活性。反应体系中甘油浓度要小于1%，而酶是储存在50%甘油中。

务必使用吹风机确保表面干燥。为了验证双酶切的准确性，可以设置对照实验。具体步骤如下：分别使用单酶进行酶切，每种酶各进行一次，使用相同的BUFFER。然后通过电泳观察，如果两管结果呈现线性，初步说明双酶切成功。同样，在进行转化实验时，这样的对照也是必不可少的，以保证实验数据的可靠性。

我可以告诉你步骤：如果两种酶的buffer浓度相同可以同时加进去切，如果不相同，先用低浓度切，再用高浓度切。我只说后一种：30/50ul体系中2ul第一种酶，3ul buffer，按照你pcr产物的亮度来配比，不足部分用水补充，反正达到30ul就可以了，切两个小时后，加第二种酶2ul，buffer5ul，用水补到50ul...

如果能够找到让两种酶同时作用的最佳缓冲液NEBuffer，那就可以同时双酶切。如果找不到就只能采用分步酶切。分步酶切应从反应要求盐浓度低的酶开始，酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求，然后加入第二种酶完成双酶切反应。NEBuffer的组成及内切酶在不同缓冲液中的活性见《内切酶在不同缓冲液...