什么是α-互补
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发布时间：2022-05-18 04:04
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热心网友
时间：2023-08-14 11:04
知道这一点，对非基础医学研究的人已足够了。 大肠杆菌的lacZ基因上缺失近操纵基因区段的突变体与带有完整的近操纵基因区段的β-半乳糖苷酸阴性突变体之间实现互补的现象叫α-互补。 由于pUC18/pUC19质粒可表达LacZ，而外源DNA插入多克隆位点将阻碍β〖CD*2〗半乳糖苷酶氨基端片段的表达，从而破坏了α互补。因此可以用组织化学筛选法挑选重组质粒。 α-互补给pUC系列的载体带来了极大的方便：载体中就没有必要包含3kb以上的β-半乳糖苷酶的编码序列。只要包含lac启动子和操作子以及α肽编码序列再加上宿主菌的lac ZM15就行了。此外，为保证质粒的稳定性，宿主菌须是lac Iq即lac阻遏蛋白过量表达型。这样，只有在用IPTG诱导时，lac系统才能表达。当pUC系列载体内导入DN*段时，由于破坏了α肽的阅读框或者引入了转录或翻译的终止信号，阻遏了α肽的表达。因而在IPTG—X-gal平板上不显蓝色。pUC系列载体仍然保留了一个氨苄青霉素抗性基因。 通过调整连接反应中外源DN*段和载体DNA的浓度比例,可以将载体的自身环化*在一定程度之下,也可以进一步采取一些特殊的克隆策略,如载体去磷酸化等来最大限度的降低载体的自身环化,还可以利用遗传学手段如α互补现象等来鉴别重组子和非重组子。
热心网友
时间：2023-08-14 11:04
楼上废话真多！
LacZ（半乳糖苷酶）有两个主要的亚基，α亚基 和 ω亚基，前者的DNA序列很短，后者比较长。α 与 ω 相结合就能表现出半乳糖苷酶活性。
所以大部分基因工程菌株的基因组上都有ω亚基的序列，但是敲除了α亚基序列，默认只表达ω亚基，不会有半乳糖苷酶活性。但是如果转化的质粒上有连续完整的α亚基序列，那么就会表达α亚基，产生“α互补”，表现出 LacZ 活性。
LacZ 活性可以用蓝白斑筛选等办法检测，有此活性通常说明 MCS 区域没有插入需要的片断，α亚基序列仍然保持完整、连续；反之则α亚基序列的连续性被破坏，MCS 区域已经插入东西。
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