请教western blot膜再生strip的原理
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发布时间:2022-04-21 23:20
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热心网友
时间:2023-07-02 06:26
western blot膜再生strip的原理都不太相同,但是目的都只有一个,就是使膜上的抗原抗体复合物分开有些stripping buffer配方中含有SDS,在低ph值或适当的温度下,可以使膜上的大多数抗原抗体复合物分开。这样可以回收再利用膜了。
Westernblot法即是一种将电泳与KIJSA结合起来的技术,可分为电泳、转印、酶免疫测定3个阶段。Westernblot法结合了电泳的高分辨率和酶免疫测定的高敏感性和特异性,是一种能用于分析样本组分的免疫学测定方法。
Westernblot法应用分子生物学、生物化学和免疫遗传学中时常会用到的一种实验方法,并且是一种能对蛋白进行定性和半定量的分析方法。是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色,并且通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
蛋白质分析中应用的W estern杂交法与DNA分析应用的Southern杂交法相似,均是把电流分离的组分从凝胶转移至一种固相支持体,并均以针对特定氨基酸(Westernblot法)或核苷酸(Southern杂交法)序列所制备的特异性样品作为探针检测其相同或相似序列。
对于蛋白质来说,通常使用的探针是抗体,它与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应。Westernblot法的主要优点在于,它能够从生物组织的粗提物或部分纯化的粗提物中检测和识别几种特异的蛋白质。将聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)分离的蛋白质从聚丙烯酰胺凝胶上通过电转移到一张合适的印迹膜上,随后用和灵敏检测系统相偶联的抗体来识别结合在膜上的一种或几种蛋白质。这一技术的灵敏度能达到标准的固相放射免疫分析的水平而又无需像免疫沉淀法那样必须对靶蛋白进行放射性标记。因此要对非放射性标记蛋白组成的复杂混合物中的某些特定蛋白进行鉴别和定量时,Westernblot法极为有用。此外,由于蛋白质的电泳分离几乎总在变性条件下进行,因此溶解、聚集以及靶蛋白与外来蛋白的共沉淀等诸多问题全都无需加以考虑。
热心网友
时间:2023-07-02 06:27
1。stripping buffer 含有适量的sds,在低ph值或适当的温度下,可以使膜上的大多数抗原抗体复合物分开。
2。完全可以用同一种抗体再杂交一次。
我的经验是同一张膜stipping3次就差不多了,而且用同一种一抗,信号强度是一次比一次递减的。
请教western blot膜再生strip的原理
western blot膜再生strip的原理都不太相同但是目的都只有一个,就是使膜上的抗原抗体复合物分开有些stripping buffer配方中含有SDS,在低ph值或适当的温度下,可以使膜上的大多数抗原抗体复合物分开。这样可以回收再利用膜。详见百度文库http://wenku.baidu.com/link?url=GHsq57RZGyHocVovaT7tt7BiD3HmQa...
请教western blot膜再生strip的原理
使用stripping buffer 可以去除一抗和二抗,然后可以重新利用膜。我用stripping buffer之后还是做同一种抗体,只不过根据ECL效果调整抗体浓度。和重新跑胶、转膜相比,呵呵,能节省点时间。由于重复使用,蛋白信号会有一定减弱,所以我一般用三次,感觉还可以。网上很多配方,可以自己配的。
做好westernblot需要注意各种细节,转给需要的你!
1×TBST摇床上洗膜三次,每次10min。 2.一条目的蛋白即一张膜需要100ul发光液A和100ul发光液B,根据膜数计算用量,提前4℃混合好发光液A和B。 3.到暗室中加混合好的发光液,在胶片左上角剪一小角(和PVDF膜一致),曝光胶片,可分别不同时长曝光,如15s,30s,1min,5min等,然后在显影液和定影液中显影,放入自来...
膜再生液怎么用
1、首先将膜充分浸泡于适当体积的再生液中,室温孵育15-30分钟并不时晃动。2、然后用镊子取出膜,用自备WesternBlot洗涤缓冲液快速淋洗膜一次,然后洗膜5分钟。3、最后膜上抗体已去除,膜已经再生,用脱脂奶粉或BSA封闭,进行下一轮WesternBlot实验即可。
生物学中的strip buffer,是种什么缓冲液啊?中文叫什么
膜再生液:Restore Western Blot Stripping Buffer is a robust but gentle formulation for stripping primary and secondary antibodies from blots to enable several reprobings on the same membrane.