发布网友 发布时间:2022-05-20 05:08
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热心网友 时间:2023-10-25 00:36
G418通过干扰核糖体的功能而阻断细胞的蛋白合成,阳性克隆中因含有抗性基因可以存活。由于基因转染到细胞内之后要一段时间才能表达出蛋白质,所以筛选不能太早一般要在转染24小时之后才开始加G418筛选。随着细胞的代谢G418的浓度和活性都会下降,所以每3~5天都要更换一次含有G418的筛选液,这时药物浓度可以降至200ug/ml加药后,在高倍镜下,阳性克隆和阴性克隆很容易辨认,在阳性克隆下用记号笔做个标记。然后刮除阴性克隆,消化阳性克隆后继续筛选培养,最后再用有限稀释法把阳性克隆在96孔板中筛选一般经过4周左右的筛选,得到的阳性克隆才都比较稳定