T4DNA连接酶的作用机制12

发布网友发布时间：2023-09-13 15:16

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热心网友时间：2024-11-20 14:34

T4DNA连接酶作用机制：分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3ˊ羟基和5ˊ磷酸末断形成磷酸二脂键。λDNA用EcoRI酶切割后形成的6个片断均具有粘性末端（Cohesive ends），在T4 DNA 连接酶作用下，可连接成原来的线状DNA。
T4DNA连接酶连接要求和结果外源DNA末端性质连接要求连接结果不对称粘性末端两种*酶消化后，需纯化载体以提高连接效率载体与外源DNA连接处的*酶切位点常可保留；非重组克隆的背景较低；外源DNA可以定向插入到载体中。对称性粘性末端线形载体DNA常需磷酸酶脱磷处理载体与外源DNA连接处的*酶切位点常可保留；重组质粒会带有外源DNA的串联拷贝；外源DNA会以两个方向插入到载体中。平端要求高浓度的DNA和连接酶载体与外源DNA连接处的*酶切位点消失；重组质粒会带有外源DNA的串联拷贝；非重组克隆的背景较高。