关于菌落总数测定

发布网友 发布时间：2022-04-26 17:06

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热心网友 时间：2023-07-01 22:05

食品中菌落总数的测定

热心网友 时间：2023-07-01 22:06

稀释因子就是稀释倍数，0.1或0.01或0.001

热心网友 时间：2023-07-01 22:06

菌落总数测定
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。菌落总数测定是用来判定食品被细菌污染的程度及卫生质量，它反映食品在生产过程中是否合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价。菌落总数的多少在一定程度上标志着食品卫生质量的优劣。
菌落总数检验工作中会遇到各种实验平板的菌落计数工作，如倾注法平板，螺旋接种平板，3M菌落总数测试纸片，滤膜法平板等。因此要高效准确的进行各类平板的菌落计数并保存所有实验数据和图片，必须要求采用的自动计数仪器支持各类平板的自动分析。
迅数菌落分析仪器采用了菌落放大图象拍摄，高分辨率的1000万像素CCD数字成像技术和Colonfast菌落智能识别技术。
在菌落自动计数方面，仪器可以快速完成包含细菌、霉菌、酵母菌等样品的各类倾注法平板、涂布法平板、滤膜法平板、空气沉降法平板、螺旋接种平板、3M纸片的菌落自动计数和浓度计算，这个功能可以促进我们食品卫生检验中“菌落总数”测定项目的自动化；自动计数菌落的速度高于500个菌落/秒，最小可以分辨的菌落直径可达 0.01mm；可构建专用计数模板以适应复杂实验室环境，计数误差控制在10%以内。“迅数”是采用最多的菌落仪品牌。食品行业适用标准：GBT 4789.2-2008 食品卫生微生物学检验 菌落总数测定
需要进行菌落计数的行业有： 疾病控制，卫生检验中心 检验检疫局 质量技术监督局
大学：食品科学与工程 微生物 发酵 免疫 医学检验 公共卫生 科学院，研究机构 环境监测部门 自来水公司
制药企业：生物制药，化学制药，抗生素企业 化妆品企业

食品企业：饮料、饮用水、乳品、保健食品、糕点糖果、膨化食品、食品添加剂、粮食及其制品、
酒类、调味品、微生态、保健食品

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消毒剂、消毒器械：消毒剂；消毒器械；生物指示剂；化学指示剂；灭菌包装物

一次性使用医疗用品：输注类；导管类；诊断、治疗器具类；透析器具类；麻醉器具类；手术巾、
敷料类；护理器材类
卫生用品 ：卫生巾；尿布；皮肤、粘膜卫生用品 ；*眼睛护理用品；其他的一次性卫生用品 
大肠菌群计数
传统的大肠菌群最可能数(MPN)法必须经过：初发酵实验，复发酵证实试验。步骤烦琐，而且阳性样品需要最少4天时间得出结果。
2008年国家颁布了新标准GB/T4789.3-2008《食品卫生微生物学检验-大肠菌群计数》。标准中的第2法-大肠菌群平板计数法，只需最少42小时即可得大肠菌群数。
大肠菌群平板计数法分两个步骤：VRBA平板计数和BGLB肉汤管复发酵证实实验。
第一步：VRBA培养基培养后，对平板上大肠菌群的典型菌落进行计数。计数的要求是：选取菌落数在30到150的平板，计数典型大肠菌群菌落-“紫红色，有沉淀环，且直径不小于0.5毫米”的菌落。
第二步：证实实验。然后将证实实验中的阳性管比例数乘以上一步计数的菌落数，再乘以稀释倍数，即得每克（或毫升）样品中大肠菌群数。
迅数全自动菌落分析仪在GB/T4789.3-2008新标准中的快速计数应用：迅数仪器的自动菌落计数能力可帮助实验人员快速准确选取“菌落数在30到150的VRBA平板”；利用彩色高像素CCD成像及Colonfast图象智能识别软件，迅数菌落仪能迅速识别“紫红色，有沉淀环，且直径不小于0.5毫米”的大肠菌群菌落，只需1秒就计算出大肠菌群典型菌落的菌落数。
综上：应用新标准GB/T4789.3-2008，结合迅数菌落分析仪，可快速测得大肠菌群典型菌落数，从而实现大肠菌群计数的快速检验。 
霉菌和酵母计数
由于霉菌和酵母能抵抗热、冷冻，以及抗菌素和辐照等贮藏及保藏技术，它们能转换某些不利于细菌的物质，而促进致病细菌的生长；有些霉菌能够合成有毒代谢产物－霉菌毒素。霉菌和酵母往往使食品表面失去色、香、味。因此霉菌和酵母也作为评价食品卫生质量的指示菌，并以霉菌和酵母计数来制定食品被污染的程度。具体检测标准参见：GB/T 4789.15-2003 食品卫生微生物检验霉菌和酵母计数。
霉菌和酵母的计数方法，与菌落总数的测定方法基本相似。主要步骤为：
将样品制作成10倍梯度的稀释液，选择3个合适的稀释度，吸取1mL于平皿，倾注培养基后，培养观察，菌落计数。对霉菌的计数，还可以采用显微镜直接镜检计数的方法。 迅数菌落分析仪器内置特殊算法，支持对包含霉菌和酵母菌样品的各类倾注法平板、涂布法平板、滤膜法平板、螺旋接种平板的菌落自动计数和浓度计算。
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金*葡萄球菌计数
典型的金*葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金*葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。
金*葡萄球菌的单个菌落在Baird-Parker琼脂平板上呈圆形,表面光滑、凸起、湿 润,直径2～3mm。灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈 (沉淀),其外常有一清晰带。 仪器快速计数应用：迅数自动菌落计数仪利用彩色高像素CCD成像及Colonfast图象智能识别软件，能迅速识别Baird-Parker琼脂平板上的典型金*葡萄球菌菌落，只需1秒就计算出金*葡萄球菌典型菌落数。适用GBT 4789.37-2008 食品卫生微生物学检验 金*葡萄球菌计数 
乳酸菌检验
仪器快速计数应用：迅数自动菌落计数仪利用彩色高像素CCD成像及Colonfast图象智能识别软件，能迅速识别MRS兼性厌氧培养平板上的典型乳酸菌菌落（含有乳杆菌属、双歧杆菌属、嗜热链球菌），只需1秒就计算出乳酸菌典型菌落数。适用GBT 4789.35-2008 食品卫生微生物学检验 食品中乳酸菌检验
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双歧杆菌检验
仪器快速计数应用：迅数自动菌落计数仪利用彩色高像素CCD成像及Colonfast图象智能识别软件，能迅速识别培养平板上的典型双歧杆菌菌落，只需1秒就计算出双歧杆菌典型菌落数。适用食品卫生微生物学检验/双歧杆菌检验GB/T4789.34-2003
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细菌计数-螺旋平板法
螺旋接种菌落计数方法是一种新的食品，化妆品以及研究用样品中微生物的快速定量方法。这种螺旋接种菌落计数方法创建于1976年，由Donnelly, C.B., J.E. Gilchrist等人最先提出，经过20多年的实际应用，国外微生物学界已经普遍认可，并列为国际分析化学家协会（AOAC）的官方方法，已被美国食品药品监督管理局（FDA）收录为国家标准。
螺旋接种菌落计数是依据阿基米德螺旋原理，使样品以对数规律螺旋线形式接种在平板上。样品接种后，菌落即分布在螺旋轨迹上，随半径的增加分布得越来越稀。采用特殊的计数栅格，自平板外周向*对平皿上的菌落进行计数，即可得到样品中微生物的数量。螺旋接种菌落计数方法加样量精确，菌落分布均匀，且可以很大程度上减少或免除样本稀释过程，因此在国外食品药品的菌落计数实验中得到广泛应用。2008年1月，中国国家质量监督检验检疫总局也通过审定了中国的SN行业标准-“食品和化妆品中的菌落计数检验方法-螺旋平板法”，于2009年2月1日正式实施。
迅数G6全自动菌落分析仪包含“螺旋接种平板分析模块(Shineso spiral plate counter)”，符合国家质检总局SN标准和美国FDA螺旋计数标准，并可兼容分析知名品牌螺旋接种仪(西班牙IUL,美国SBI)接种的螺旋平板，其兼容性已在中国知名微生物研究和检测机构得到验证。
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Petrifilm测试法(菌落总数、大肠菌群、金*葡萄球菌、大肠杆菌)
3M Petrifilm测试片法是2008年中国食品卫生标准修改后进入国家标准的菌落总数测定新方法。这种方法不需要专门的实验室和专业检验人员，也不需要配制专门的培养基及有此带来的消毒、清洗工作。因此受到不需要精确定量的基层食品微生物实验室的极大欢迎。
迅数G型菌落分析仪对2009年最新颁布的国家食品卫生标准SN/T2098-2008-“食品和化妆品中的菌落计数检测方法-螺旋平板法”中的“螺旋平板计数”和GB4789-2008食品卫生微生物学检验标准中的“3M Petrifilm细菌总数测试片”等新方法的自动分析支持，使迅数菌落仪一机多用且支持最新国家标准。
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乳及乳制品中舒巴坦敏感β－内酰胺酶类药物检验
β-内酰胺酶为我国不允许使用的食品添加剂,该酶的使用掩盖了牛奶中实际含有的抗生素。β-内酰胺酶能够使青霉素内酰胺结构破坏而失去活性，导致青霉素、头孢菌素等抗生素类药物耐药性增高，从而大大降低了人们抵抗传染病的能力，给消费者的身体健康带来危害。
在2009年全国打击违法添加非食用物质和滥用食品添加剂专项整治中， 适用标准：杯碟法“测定乳及乳制品中舒巴坦敏感β-内酰胺酶类药物检验”，该方法为卫生部指定方法。
原理：该方法采用对青霉素类药物绝对敏感的标准菌株，利用舒巴坦特异性抑制β-内酰胺酶的活性，并加入青霉素作为对照，通过比对加入β-内酰胺酶抑制剂与未加入抑制剂的样品所产生的抑制圈的大小来间接测定样品是否含有β-内酰胺酶类药物。
测量与判定：迅数“抑菌圈测量”模块对单碟（每碟含4到12个抑菌圈）测量时间小于1秒，可在自动完成平板上多个抑菌圈准确测量的基础上结合报告“β- 内酰胺酶类药物检验结果阳性或阴性”的卫生部新标准规定，轻松实现舒巴坦敏感β-内酰胺酶类物质是否存在的自动化分析。
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培养基质量控制

在微生物研究和检测工作中，最基本的研究工具就是培养基！培养基的质量控制就成为影响微生物研究和检测工作质量的重要方面。
迅数菌落仪可以快速菌落总数的准确统计，其菌落形态分析功能可以自动完成对平板上所有菌落的形态分析（直径，面积，圆度等）和直径平均值统计；从而帮助微生物实验室进行更高质量的培养基质量控制生物评价（如：生长率实验，菌落平均直径计算等）。国内微生物培养基最高评价机构-中国药品生物制品检定所培养基室从2004年底就开始在使用迅数这个品牌菌落仪做培养基质量控制。
迅数全自动菌落分析仪不仅在应用中体现了上述技术优势，而且由于实验效率的提高，使用部门得以提高对培养基质控评价的频次，进一步也提升了培养基的质量管理指标。
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抗生素残留检测
随着我国养殖的集约化，饲料药物添加剂和各类抗生素在生产中广泛应用，使畜禽类产品药物残留问题日益突出。而 根据卫生研究及临床资料，人们食用被药物污染和残留的水产品后容易出现毒性反应和 增强细菌耐药性 。因此各种 畜禽产品中的 抗生素残留检验就变得至关重要。
微生物抑制法是抗生素残留量检验最广泛应用的简便而费用低廉的方法。测定原理是根据抗生素对其敏感的特定微生物的生长抑制作用 ,通过抑菌圈的大小来进行样品中抗微生物药物残留的 定量检验或定性判断(测定抑菌圈直径，样品抑菌圈直径小于阳性对照抑菌圈直径判定为阴性，否则判定为阳性)。迅数_ZS 型自动抑菌圈测量与分析系统是替代人工实现抑菌圈自动测量和标准化的有力工具。 方法举例：肉和肉制品中四环素族抗生素残留量的检验
原理：四环素族(四环素、土霉素、金霉素) 抗生素具有很强的抑菌作用。在接有特定微生物的平板培养基上放入牛津杯，在牛津杯内加满试样溶液，培养后测量抑菌圈的大小，抑菌圈的大小通过换算即得抗生素的残留量。
过程：菌液和检定用平板的制备 －－- 标准曲线的绘制 －－- 试样中四环素族抗生素残留量的检定和检定结果的计算：分别求出 3 个检定用平板上参考浓度和被检试样抑菌圈直径数值校正后，从四环素标准曲线上查出被检试样中四环素的含量。从标准曲线上查出被检试样液的抗生素残留量乘以稀释倍数，结果以 mg/kg计算。

热心网友 时间：2023-07-01 22:07

可悲也

热心网友 时间：2023-07-01 22:08

楼主你该问的不问，不该问的却问了。

早有耳闻新版国家标准有误，也不知道哪个家伙审的稿，那么白痴的公式说明居然都会放出来当标准，真是被同行笑话。

公式没错。
错的是n1和n2代表的是平板数，而不是菌落数！

计算样品的总菌落数或者单位体积内的菌落数，无非就是抽取一部分样品液体适当稀释使其长出便于计数的菌落。然后把计数得到的菌落的总数除以涂平板用掉的体积，就是稀释液中的菌体密度，再乘以稀释的倍数，不就是原来样品的菌体密度嘛。

原理就是这么简单。
这里所谓的稀释因子就是换算到样品密度所需要乘的系数。
举例：1g样品用10ml水充分悬浮，将悬浮液稀释了100倍后发现菌落疏密适宜，且之后的稀释1000也是适宜，这两个稀释度各有3个平板可用于计数，总共计数得660个菌落，每次涂布用200μL。因为你稀释1000倍的液体是将100倍的稀释液再稀释十倍所得，所以1000倍稀释液涂的十个板相当于是100倍稀释液的一个板。
100倍稀释液的菌体密度就是660个除以（3×0.2+0.3×0.2）ml，既然100倍稀释液的密度知道了，那么稀释前的就是乘上100，提取0.2的公因子，得500，也就是稀释的倍数，就是所谓的稀释因子。
原来样品的悬浮液的菌体密度是660个除以（3+0.3）ml再乘上500的稀释因子。
如果你要计算菌落总数，那么稀释因子就再算上悬浮的10ml，也就是660÷3.3再乘500×10等于1100000个。
总结一下，如果是计算菌落总数而不是密度，稀释因子就是悬浮液体积乘以第一个适宜度的稀释倍数除以每次涂布用掉稀释液体积。

明白了不？

标准原文中分子分母的单位都是个数，一比之后量纲为1，一看就是不对的。