细胞计数仪能计算原代细胞吗?

发布网友发布时间：2022-04-25 00:02

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热心网友时间：2023-10-16 08:56

原代细胞要建立稳定的细胞系，必须满足一定的条件。

转染24小时后，细胞消化计数。将细胞植入96孔板，保证每孔2-3个细胞。细胞贴壁后，加入抗生素进行筛选。筛选时间和浓度取决于细胞。一般来说，G418起效一周，嘌呤2-3天。脂质体单克隆抗体筛选时间长，效率仅为1%左右。病毒转染，首先包装细胞，通常是293个细胞，包装病毒，然后用病毒转染靶细胞。

包装病毒取决于不同类型的病毒，一般需要3-5天。测定包装病毒的滴度，根据滴度确定病毒转染靶细胞的量。转染后1-2天用抗生素筛选稳定的细胞株。转染效率高，但步骤复杂。目前，许多公司为稳定细胞系的构建提供技术服务，如杭州博恩、南京凯基等。它们可以为各种载体和细胞系的构建提供一整套技术服务。

脂质体转染后克隆筛选出稳定的细胞株。二是通过逆转录病毒和慢病毒转染筛选稳定的细胞株。它可以通过蛋白酶或其他方法从人体组织中获得，如小鼠组织、大鼠组织、兔组织等，称为原代细胞。一般认为，在第一代培养的原代细胞和转移到第十代的细胞统称为原代细胞培养。

使原代细胞在人工条件下存活、生长、增殖和转移，研究细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题。通过选择或克隆形成方法从原代培养细胞中获得具有特殊性质的细胞或标记物称为细胞系。一般认为细胞系是单个细胞通过分离培养或筛选而形成的细胞群。

总而言之，实验环境稳定，温度适宜，原代细胞健康。在满足这些条件后，再等待一段时间，即可进行栽培，这样才可以构建稳定的细胞株。