您好! 我想咨询平茹菌种制做方法。
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发布时间：2023-06-22 22:51
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时间：2024-11-26 09:02
（一）平茹菌种的分级
平茹菌种是通过人工培育的纯菌丝体及其培养基的混合体。生产中通常分为*，即母种（一级种），原种（二级种），栽培种（*种）。
1、母种；利用平茹的子实体经组织分离或孢子分离培育而成，一般盛装在玻璃试管内。
2、原种：由母种转扩而成，容器一般选用标准菌种瓶，药用葡萄糖瓶或其他容器，培养料有棉籽壳、麦粒、玉米粒、玉米芯、木屑等。
3、栽培种：由原种转扩而成，一瓶原种可以转扩40-60瓶或20-25袋栽培种。
（二）母种的制作
1、平茹母种培养基的制备；
（1）常用母种培养基配方
A、PP培养基：马铃薯（去皮）200克，琼脂20克，葡萄糖20克，水1000毫升。
B、马铃薯综合培养基：马铃薯（去皮）200克，葡萄糖20克，琼脂20克，磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，水1000毫升。
（2）母种培养基的制作
A、培养基的配制
将马铃薯去皮，称量200克，切成薄片，放入锅中，锅内加水1200毫升，加热煮沸20分钟，然后用四层纱布过滤马铃薯汁液，在滤夜中加入20克琼脂，继续加热至琼脂完全溶化，琼脂完全溶化后，最后加入葡萄糖、磷及二氢钾、硫酸镁、蛋白质等物质充分搅拌均匀，补足水分至1000毫升，再用四层纱布滤去杂质。
B、趁热分装试管：分装试管多采用18毫米×18毫米的试管，每管装入量为试管的1/5。
C、加装棉塞：棉塞应用较高级的棉花制作，棉塞的大小应与度管相适宜，塞入长度占棉塞长度的2/3，松紧度要适中，即能保证通风，又要防止污染。
D、扎捆装锅：加装好棉塞的试管用小布装分装好，上面用牛皮纸包扎好，用细绳捆紧，竖直放手手提式高压灭菌锅的内桶里。
E、灭菌：用手提高压锅高压灭菌30分钟。
F、摆斜面：当培养温度降至60 ℃左右时，及时将试管摆成斜面，将试管逐支摆放在桌子上的细木条上，使培养基的长度为试管总长度的1/2左右，冷却一天后收起，收时斜面往上防止培养基滑动，断裂。
2、平茹母种的分离（组织分离法）
（1）种茹选择：选择长势好，茹形完整，色泽适中，刚进入成熟初期的平茹子实体。第二、三潮出茹高峰期选择茹体。
（2）种茹的处理与消毒：将挑选好的平茹去掉杂质，放置1-2小时，使茹体失去过多水分，在接种箱内用75%酒精对平茹表面进行消毒。
（3）分离和移接：将分离用的小刀和接种针在酒精灯光焰上灼烧至发红，冷却后用小刀把平茹菌盖切开，在菌褶与菌柄交接处制一田形挑取绿豆块大小的菌肉组织，迅速放入母种培养基斜面的中间部位。
（4）菌丝培养：将接过平茹组织块的试管放入25℃左右恒温培养箱中培养5-7天，挑选菌丝生长健壮，浓密洁白，长势旺盛，无杂菌污染的试管，再进行转接，菌丝满管后，就得到了所需平茹的母种。
3、平茹母种的转扩
严格挑选所要应用的平茹母种，要求其菌丝洁白，浓密，无杂菌污染，培养基不失水萎缩，一支原始母种可扩接40-60支母种。
（三）原种的制作
1、培养料的制备
（1）棉子壳培养料
A、棉子壳100千克，麸皮10千克，蔗糖1千克，磷肥1千克，石膏粉1千克。
B、棉子壳100千克，生石灰1千克，石膏粉1千克，加水1.2-1.3倍拌匀。
（2）麦粒培养基：A麦粒100千克，石膏粉2%，麦粒用水浸泡10-12小时，煮熟晾干后加入辅料拌匀。
2、装瓶与灭菌
菌种瓶洗净控干后装入适量的培养料，棉子壳培养料装瓶肩处，表面压平压实，将瓶外壁擦试干净，麦粒种装至瓶的1/2或2/3为宜。
高压灭菌，在0.5兆帕的压力下保持90-120分钟，麦炷培养基可适当延长灭菌时间；常压灭菌，当锅内温度达到100℃后，保持10-14小时，制作麦粒菌种时，一般不宜采用常压灭菌法。
3、接种和培菌
将冷却的菌种装放在接种箱内，要转接的平茹母种及所需接种用具等也要放入接种箱内，先打开紫外灯杀菌，再用甲醛和高锰酸钾熏蒸消毒30分钟后，进行接种。
接种的原种贴上标签放入培养室进行菌丝培养，在20-26℃的条件下，一般25-35天平茹菌丝就可长满原种瓶。
（四）栽培种的制作
栽培种可用菌种瓶、塑料袋制作，因塑料袋成本低，使用方便，生产中多用塑料袋制作栽培种。
1、塑料的种类和规格
高压灭菌多采用聚丙烯塑料袋，常压灭菌多采用聚乙烯塑料袋。一般规格为宽15-17厘米，长33-35厘米，厚0.04-0.05毫米。
2、培养料的配制
栽培种的培养料与原种基本相同，为了培育出活力旺盛的平茹栽培种，在栽培种培养料中常加入5%的麦麸。
3、装袋灭菌
培养料拌匀后，将栽好的塑料袋一端折叠一部分，在另一端装入培养料，装至塑料袋剩5厘米左右时，用力将斜面压平压实，并将袋口扎好，灭菌方法与原种相同，灭菌时间应比菌种瓶要长些。
4、接种和培菌
在接种箱内采用两端接种，每瓶原种可扩接栽培种20-25袋，接种好的栽培种及时移至培养室培养，室温保持20-26℃，30-40天菌丝即可长满菌袋。
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