铜皂法中配置不同浓度的油酸用什么配?无水乙醇可以吗
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发布时间：2023-08-21 11:49
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时间：2024-07-08 01:23
是互溶的
油膜法估测油酸分子直径的方法
油酸酒精的体积浓度为n 又用滴管测得每N滴这种油酸酒精的体积为V，将一滴这种溶液滴在浅盘中的水面上，在玻璃板上描出油膜边界线，再把玻璃板放在画有边长为a的正方形小格的纸上 测得油膜占小方格数为m。
分子直径d＝H＝(n×V/N)/a×a×m
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时间：2024-07-08 01:23
脂肪酶(Novezymes公司)，0.0667 mol/L的KH2PO4-Na2HPO4 缓冲溶液(pH值为7.38； )，脂肪酸显色剂(5%醋酸铜溶液，用吡啶调节pH=6.2)，正己烷，油酸，橄榄油，盐酸，无水乙醇，分光光度计，pH计，水/油浴恒温磁力搅拌器，离心机，分析天平等。
2.脂肪酸吸光度工作曲线的绘制
配制一系列不同浓度（1.5，2.5，3.5，4.5，5.5，6.5，7.5，10，12.5，15μmol/mL）的油酸正己烷溶液，分别取5 mL于10 mL离心管中中，加入1 mL显色剂，磁力搅拌3 min， 油酸分子与Cu2+生成绿色的络合物，离心后取上层有机相在714 nm处测定吸光度。用未加油酸的空白溶液作参比，以吸光度对油酸浓度作图，得一直线，即为脂肪酸吸光度工作曲线。
3.酶液的配置
分别称取固定化酶0.1 g左右溶于2 mL，pH=7.4，0.0667 mol/L的磷酸缓冲溶液中，振荡均匀，40℃水浴预热待用。
4.酶活测定方法
实验组：取3 mL.0.0667 mol/L磷酸盐缓冲溶液和1mL橄榄油，放入油浴恒温磁力搅拌器40℃中预热5 min， 加入2 mL（含0.1 g酶制剂）酶溶液，磁力搅拌15 min，立即加入1mL 6 mol/L盐酸溶液和6 mL的95%无水乙醇溶液，振荡2 min，终止反应。分别加入6 mL正己烷溶液萃取生成的脂肪酸。取上层有机相5 mL于10 mL离心管中，加入1mL显色剂，涡旋均匀后，产生的脂肪酸与Cu2+生成绿色络合物。静置离心10 min后, 取上层含有脂肪酸铜的正己烷溶液，在714 nm波长处测其吸光度。
空白组：以相同方法制备不含脂肪酶的空白溶液为参比，对照脂肪酸吸光度工作曲线，即可求得脂肪酸的浓度。
5.酶活定义及计算公式
脂肪酶酶活力单位定义为：在一定条件下，每分钟释放出1μmol 脂肪酸的酶量定义为1个脂肪酶活力单位(U)。按下式计算酶活：
X=cV/tm
式中：X为脂肪酶活力，U/g，c为脂肪酸浓度，μmol/mL；V为脂肪酸溶液的体积，mL；m为酶液的用量，g；t为作用时间，min。
所测的脂肪酶活力有：lipase-435（20Ug）,lipase RM（42U/g),猪胰脂酶（69U/g）
问题：为什么我测的酶活力值会这么小呢？看别人文献上面给的数据，
