细胞培养箱内的支原体怎么检测
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发布时间:2022-04-25 14:10
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时间:2023-10-08 16:45
可用直接培养法检测细胞培养箱内的支原体污染。
培养基准备: 基本配方为Difco PPLO broth(60%),马血清(20%),15%酵母膏溶液(10%),10x储存液(10%)。由于培养时间长,可加50u/ml青霉素至10x储存液 或加入乙酸铊(1:2000)至培养基中以防止其他细菌的污染。 10x储存液(1升): 称取50克葡萄糖,10克L-盐酸精氨酸溶于1升蒸馏水中。用0.22μm无菌过滤膜过滤除菌,分装100ml至瓶中,-70℃保存。 液体培养基(1升): 称取21克Difco PPLO broth,0.02克酚红于600ml蒸馏水中加热搅拌溶解。灭菌121℃15分钟灭菌。待温度降低至室温后于无菌操作台内加入200ml马血 清,100ml 15%酵母膏溶液及100ml解冻的10x储存液,混合均匀后分装至已灭菌的有盖螺旋试管中,10ml/管。4℃保存,保存期限为1个月。 固体培养基: 称取21克Difco PPLO broth,0.02克酚红,15克Bacto agar于600ml蒸馏水中,加热溶解。121℃15分钟灭菌,放入50℃水浴中,待温度降至50℃时于无菌超净台内加入200ml马血清,100ml 15%酵母膏溶液及解冻的10x储存液,混合均匀后倒入60x15mm无菌培养皿中,5ml/皿。保存于4℃,期限为1个月。 步骤:取1ml细胞培养液或0.2ml细胞悬浮液接种于液体培养基中,置于37℃培养2周,观察是否有浑浊或pH变化。培养一 周及两周后,分别取0.1ml液体培养液涂于琼脂平板上,倒置于厌氧缸中,37℃培养至少3周,持续观察是否有支原体菌落出现。另取1ml细胞培养液或 0.2ml细胞悬浮液涂于琼脂平板上,37℃厌氧培养3周,持续观察是否有支原体菌落出现。另作正负对照组,正对照为Acholeplasma laidlawii(ATCC 23206)与M. arginini(ATCC 23838)。负对照组为待测细胞的新鲜培养液。 结果判断:支原体生长较慢,所以先在液体培养基中培养1-2周增殖后再培养于琼脂平板上,至少培养3周后才能断定是否有支原体 污染。所以总个测试要5周才知道正确结果。典型的支原体菌落是荷包蛋形,是由于支原体网琼脂下层生长所致,为无色透明菌落,大小约为10-55μm 。但是并非所有支原体都是荷包蛋菌落,有些是圆形或类似黏菌类形态。区分细胞或是气泡造成的类似菌落,可将其自琼脂平板上切下,重新培养于液体培养基中, 培养一周后再接种入琼脂平板,细胞和菌落则不会生长。
细胞培养箱内的支原体怎么检测
可用直接培养法检测细胞培养箱内的支原体污染。培养基准备: 基本配方为Difco PPLO broth(60%),马血清(20%),15%酵母膏溶液(10%),10x储存液(10%)。由于培养时间长,可加50u/ml青霉素至10x储存液 或加入乙酸铊(1:2000)至培养基中以防止其他细菌的污染。 10x储存液(1升): 称取50克...
检测细菌内毒素有哪些辅剂??显色基质法鲎试剂需...
检测细菌内毒素的辅剂主要包括以下几种:1. 稀释剂:用于稀释鲎试剂和样品,以获得准确的检测结果。2. 缓冲剂:用于维持鲎试剂的反应速度和pH值,常见的有Tris-HCl、Veronal Buffer等。3. 增溶剂:用于增加细菌内毒素在溶液中的溶解度,常见的有聚乙二醇、吐温等。4. 鲎试剂:用于检测细菌内毒素的鲎试剂,主要成分为鲎血的提取物。显色基质法鲎试剂需要以下几种辅剂:1. 显色基质:用于与鲎试剂反应后产生颜色变化,常见的有氯化钙、磷酸盐等。2. 酶:用于催化反应,加速颜色的产生,常见的有葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶等。3. 缓冲剂:用于维持反应…厦门市鲎试剂实验厂有限公司提供细菌内毒素标准品、细菌内毒素检查用水等各种细菌内毒素检测辅剂和无热原无葡聚糖试管、微板、吸头、真空采血管等各种细菌内毒素检测试验耗材。专业、高品质的细菌内毒素检测辅剂和试验耗材是你试验成功的保证。...
细胞培养过程中支原体污染的检测和处理
检测方法比较表明,微生物培养耗时1到4周,DNA荧光染色不够准确,杂交反应中革兰氏阳性菌的存在可能导致非特异性信号干扰,而PCR能快速检测3-100CFU/mL,准确检测20-180CFU/mL的支原体。一旦检测到污染,建议采取高压灭菌培养箱、更换无支原体污染的培养箱等措施。若无无支原体的培养箱可用,清除支原体势在...
支原体污染的简介
目前常用的检测方法有:1. 试剂盒检测法:目前已有专门做支原体检测的试剂盒,可以用细胞滴片进行检测。2. 观察细胞的形态和生长特征:支原体污染比较严重时可出现生长减慢,有的培养基pH明显变酸,并出现细胞病变,以此可依次对支原体污染进行检测,但有些情况下支原体污染引起的病变特征与病毒感染相似,因...
细胞培养中如何识别细胞污染?
细菌、酵母、真菌、霉菌、支原体以及其他的培养细胞都可能引起污染。一、肉眼观察 肉眼观察,把培养瓶或培养皿拿起来,对着光线检查。浑浊情况。 即使细胞密度很高,培养基也应该是透明的。轻轻移动或晃动培养瓶,观察培养基的浑浊或悬浮情况,一些霉菌可能会在培养基的表面形成菌落。培养基颜色的变化。 酸...
支原体污染的认识、检测、防治
检测支原体污染的手段多种多样,包括:显微镜下的视觉检测,通过相差油镜观察细胞表面和细胞间隙的暗色微粒;荧光染色法,借助Hoechst 33258染料标记DNA,显微镜下呈现亮绿色小点;电镜观察,扫描或透射电镜提供快速且详尽的检查;DNA分子条文检查和支原体培养,准确但过程复杂;PCR检测,利用基因序列的特异性,...
细胞发现有支原体污染了,已弃,孵箱内容易存有支原体而影响别的或新复 ...
你可以随机取样,在油镜下观察细胞表面和细胞之间有无暗色微小颗粒,或者用专门检测支原体的试剂盒检测一下有没支原体。如果要预防,往培养基里加适量四环素类、大环内酯类、某些氟喹诺酮类、M-Plasmocin抗生素可以预防。培养箱中喷洒支原体抑制剂(换句话说就是用含抗生素的消毒剂或水擦培养箱和其它细胞...
支原体污染对细胞有哪些影响?受污染的细胞房该怎么办?
细胞培养皿一旦感染支原体,通常不会有颜色变化。支原体附着在细胞系表面,通过抢夺细胞培养基中的营养物质而增殖。如果将这些被污染的细胞用于实验或生产,将会严重影响结果。上海梵通生物消毒服务研发的汽化过氧化氢消毒机全方位喷孔,汽化扩散均匀,使消毒剂快速充满整个封闭空间,可以全方位的解决细胞房微...
如何防止细胞培养出现污染
1、从培养箱取放细胞前,用酒精清洁双手(或手套),尽量缩短开门时间和减少开门次数。培养瓶放入培养箱前,用酒精消毒表面,并稍等至酒精挥发后再放入,以免培养箱内滞留过多乙醇蒸气。2、操作的时候防护服、口罩、手套缺一不可。操作前,准备好所有实验所需物品,以减少走动,物品需有序摆放在超净台...
在细胞培养的过程中,若细胞培养皿/瓶中出现污染,该如何操作或挽救?如 ...
好象不能挽救,以失败告终。要判断污染源必须操作时有对照才行,如一组未接种的培养基和一组接种的培养基,如都污染则极可能是培养基灭菌不彻底,反之则是操作过程不规范造成的。
我的细胞污染了,谁能帮我看看呀,有录像
首先,41℃不知道是你哪里的出来的灭菌方式,要灭菌都是121℃下20分钟以上才行。要分析哪里污染可以按照步骤来,首先,考虑培养基。取样培养基,在37°培养箱中做无菌试验,看看培养基有问题没。接着,换一批培养瓶,枪头。因为我不知道你的实验条件怎么样,比如说枪头是灭菌的还是一次性包装中的吸量...