配制培养基的原则

发布网友发布时间：2023-09-27 13:42

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1. 选择适宜的营养物质总体而言,所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源,但由于微生物营养类型复杂,不同微生物对营养物质的需求是不一样的,因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。自养型微生物能从简单的无机物合成自身需要的糖、脂类、蛋白质、核酸、维生素等复杂的有机物,因此培养自养型微生物的培养基完全可以(或应该)由简单的无机物组成。例如,培养化能自养型的氧化硫硫杆菌的培养基组成见。在该培养基配制过程中并未专门加入其他碳源物质,而是依靠空气中和溶于水中的co2为氧化硫硫杆菌提供碳源。培养其他化能自养型微生物与上述培养基成分基本类似,只是能源物质有所改变。对光能自养型微生物而言,除需要各类营养物质外,还需光照提供能源。培养异养型微生物需要在培养基中添加有机物,而且不同类型异养型微生物的营养要求差别很大,因此其培养基组成也相差很远。例如,培养大肠杆菌的培养基组成比较简单,而有些异养型微生物的培养基的成份非常复杂,如肠膜明串珠菌需要生长因子,若配制培养它的合成培养基时,需要在培养基中添加的生长因子多达33种,因此通常采用天然有机物来为它提供生长所需的生长因子。就微生物主要类型而言,有细菌、放线菌、酵母菌、霉菌、原生动物、藻类及病毒之分,培养它们所需的培养基各不相同。在实验室中常用牛肉膏蛋白胨培养基（或简称普通肉汤培养基）培养细菌，用高氏1号合成培养基培养放线菌，培养酵母菌一般用麦芽汁培养基,它是将麦芽粉与4倍水混匀,在58~65℃条件下保温3~4小时至完全糖化,调整糖液浓度为10о巴林, 煮沸后用纱布过滤,调ph为6.0配制而成。麦芽粉组成复杂,能为酵母菌提供足够的营养物质;培养霉菌则一般用查氏合成培养基。培养基的ph必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适ph条件各不相同,一般来讲,细菌与放线菌适于在ph7~7.5范围内生长,酵母菌和霉菌通常在ph4.5~6范围内生长。值得注意的是,在微生物生长繁殖和代谢过程中,由于营养物质被分解利用和代谢产物的形成与积累,会导致培养基ph发生变化,若不对培养基ph条件进行控制,往往导致微生物生长速度或(和)代谢产物产量降低。因此,为了维持培养基ph的相对恒定,通常在培养基中加入ph缓冲剂,常用的缓冲剂是一氢和二氢磷酸盐(如k2hpo4和kh2po4)组成的混合物。k2hpo4溶液呈碱性, kh2po4溶液呈酸性,两种物质的等克分子混合溶液的ph值为6.8。当培养基中酸性物质积累导致h 浓度增加时, h 与弱碱性盐结合形成弱酸性化合物,培养基ph不会过度降低;如果培养基中oh-浓度增加, oh-则与弱酸性盐结合形成弱碱性化合物,培养基ph也不会过度升高。但k2hpo4/kh2po4缓冲系统只能在一定的ph范围（ph6.4~7.2）内起调节作用。有些微生物，如乳酸菌能大量产酸,上述缓冲系统就难以起到缓冲作用,此时可在培养基中添加难溶的碳酸盐(如caco3)来进行调节, caco3难溶于水,不会使培养基ph过度升高,但它可以不断中和微生物产生的酸,同时释放出co2,将培养基ph控制在一定范围内。　在培养基中还存在一些天然的缓冲系统,如氨基酸、肽、蛋白质都属于两性电解质,也可起到缓冲剂的作用。</P<>