早起做pcr时出现条带换了引物后就不在出现为什么
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发布时间：2023-09-10 14:10
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时间：2024-10-20 20:59
PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。
模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处 理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应 固定不宜随意更改。
酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。
引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不 理想、容易弥散的常见原因。有些批号的引物合成质量有问题，两条引物一条浓度 高，一条浓度低，造成低效率的不对称扩增，对策为：①选定一个好的引物合成单 位。②引物的浓度不仅要看OD值，更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳，一定要有引物条带出现，而且两引物带的亮度应大体一致，如一条引物有条带，一条引物无条带，此时做PCR有可能失败，应和引物合成单位协商解决。如一条引物亮度高，一条亮度低，在稀释引物时要平衡其浓度。③引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期放冰箱冷藏部分，导致引物变质降解失效。④引物设计不合理，如引物长度不够，引物之间形成二聚体等。
Mg2+浓度：Mg2+离子浓度对PCR扩增效率影响很大，浓度过高可降低PCR扩增的特 异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。
反应体积的改变：通常进行PCR扩增采用的体积为20ul、30ul、50ul。或100ul，应用多 大体积进行PCR扩增，是根据科研和临床检测不同目的而设定，在做小体积如20ul 后，再做大体积时，一定要模索条件，否则容易失败。
物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。有时还有必要用标准的温度计，检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度，这也是PCR失败的原因之一。
靶序列变异：如靶序列发生突变或缺失，影响引物与模板特异性结合，或因靶序列某 段缺失使引物与模板失去互补序列，其PCR扩增是不会成功的。
早起做pcr时出现条带换了引物后就不在出现为什么
在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处 理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应 固定不宜随意更改。酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。引物：...
我做PCR为什么筛温度的时候都能P出条带,等到筛好温度了却没有条带了...
PCR的模板或引物比较复杂时，各种怪事都会有。如果你的实验体系没问题，你可以试试先以较高退火温度p上5个循环，再以你筛的温度p上30个循环。或者把你的目的条带切胶回收，稀释后作模板再p。
琼脂糖电泳时为什么会在引物二聚体的 后面一点点紧接着出现一条带?
你们做过没做过对照试验？如果没有的话建议做两个对照试验：一是PCR体系里加模板和酶，不加引物；二是PCR体系里加引物和酶，不加模板。这两个和正常实验组一起P一起跑胶，然后对照着看一下，到底是哪个组分的问题。另外，不涉及保密内容的话，能否多提供给我一点信息？你们这个酶做其他PCR也用了吗...
pcr杂带在目的条带之上。以前有做过同样的程序,同样的引物和酶。
一，误差性，即便是用同样的东西，同样的程序，分别两次来做，出现的结果也可能是不一样的，因为每次取的东西，用的PCR仪都会有误差。二，可能是主要的原因，所用的引物质量不是太好。建议：一种是用现在的引物，将PCR的退火温度提高。另一种是换一家好的公司重合引物。
PCR电泳后出现两条目的条带?亮的那条目的条带不在我想要的那个片段范围...
很可能是引物设计的问题，试试改变退火温度或调整扩增程序，如果想搞清楚具体原因，建议分别切胶测序，弄清楚扩增出来的是什么东东
PCR扩增为什么会产生除目的基因条带外的其他条带
还有一条其实也很重要，就是退货温度，用软件查出来的温度不一定就是准的，通常情况下，如果退火温度过低，PCR产物容易出现多条带，原因就是非特异结合；退火温度高的话相反，出弥散 还有许多情况你都找不到原因，很有可能就是用的胶不好造成的 如果你是自己做实验，建议先查引物结构，再查基因结构，...
PCR不能扩增出目的条带,用的是文献中提供的引物
1、用引物在ncbi里去查，看看是否完全匹配，国外文献尚有错误，如果是国内的...；2、不是提高退火温度，而是降低，看看是否有非特异性的产物；3、有条件的话，建议找一个阳性对照，质粒最方便。如果没有这个基因的，可以找一个看家基因的，再合成一对引物，做阳性对照。检查整个体系中是否有问题。阳性...
RT-PCR实验中为什么只出现一条引物的带
说明没扩出来呗 建议 1.增加actin等参照管做对照.actin表达比较保守且表达量高,均可以扩出来.如果扩不出来说明你RNA有问题,重新抽提 2.如果参照没问题,和你的引物分别一起扩,配一样的体系,如果你的引物还扩不出来,换用好点的酶试下 3.如果还出不来,重新设计引物吧 ...
PCR后进行DNA电泳跑的条带是一条,但不是我想要的条带,是怎么回事啊?
你的结果上的“一条带”位置在哪里？我想你能确定不是目的带的话，那应该结果显示的条带比较靠前，DNA长度较小。那很有可能是引物二聚体。出现这个情况，可能的原因有3：1。引物本身不对，不是目的DNA扩增需要的引物。2。DNA回收提纯的问题 3。PCR体系内镁离子浓度问题。。。建议排查下各项。
...电泳结果只有引物二聚体,没有目的条带,更换引物了也这样,求高手解答...
1. 我认为你的引物浓度基本是合理的，而且引物浓度在一定范围内不会造成没有目的条带的现象。2.如果你是选用与外文文献相同的引物，可以参考他的反应条件，或者在他的退火温度上降低2-3度。3. 我觉得你的模板浓度已经不小了，我的PCR只用了30ng或者3ng。上述条件没给出扩增的循环数，建议查查文献，...
