western blot和elisa用的二抗相同 为什么显色液不同
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发布时间：2022-04-25 23:01
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热心网友
时间：2023-10-16 21:51
其实都是HRP催化底物反应,与固相载体无关,他们在反应的整个过程都起到了相同的作用－－供氢体
HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2)和供氢体(DH2).供氢体多为无色的还原型染料,通过反应可生成有色的氧化型染料(D).酶促反应的过程如下:
HRP
DH2＋H2O2────→D＋2H2O
目前用得较广泛和较满意的供氢体是：OPD(邻苯二胺)和TMB(四甲基联苯胺).
DAB(3.3－二氨基联苯胺)的反应产物为不溶性沉淀物,并有电子密度,故适宜于做免疫酶染色或电镜观察.
5AS(5-氨基水杨酸)早期曾用于ELISA,但其溶解度不够大,且空白孔不易控制到无色,现已很少应用.
OT(邻联甲苯胺)的特点是能产生鲜艳的蓝绿色产物且灵敏度较高,但反应中受温度影响较大,而且由于产物不稳定,需要在短时间内进行测定.
目前用得较广泛和较满意的供氢体是：OPD(邻苯二胺)和TMB(四甲基联苯胺).前者形成的产物为深桔*或棕色,后者产物为蓝绿色,二者的可溶性均好,在避光处颜色稳定,空白可近于无色,灵敏度上据报道后者比前者可高4倍以上.
另外,还有一种供氢体称ABTS[2, 2'-边氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯啉-6磺酸)],其反应产物呈蓝绿色,且灵敏度和稳定性均好.尤其是在致癌的潜在可能性方面,ABTS与TMB皆是值得被优选的供氢体.
热心网友
时间：2023-10-16 21:52
其实都是HRP催化底物反应，与固相载体无关，他们在反应的整个过程都起到了相同的作用－－供氢体
HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2)和供氢体(DH2)。供氢体多为无色的还原型染料，通过反应可生成有色的氧化型染料(D)。酶促反应的过程如下:
HRP
DH2＋H2O2────→D＋2H2O
目前用得较广泛和较满意的供氢体是：OPD(邻苯二胺)和TMB(四甲基联苯胺)。
DAB(3.3－二氨基联苯胺)的反应产物为不溶性沉淀物，并有电子密度，故适宜于做免疫酶染色或电镜观察。
5AS(5-氨基水杨酸)早期曾用于ELISA，但其溶解度不够大，且空白孔不易控制到无色，现已很少应用。
OT(邻联甲苯胺)的特点是能产生鲜艳的蓝绿色产物且灵敏度较高，但反应中受温度影响较大，而且由于产物不稳定，需要在短时间内进行测定。
目前用得较广泛和较满意的供氢体是：OPD(邻苯二胺)和TMB(四甲基联苯胺)。前者形成的产物为深桔*或棕色，后者产物为蓝绿色，二者的可溶性均好，在避光处颜色稳定，空白可近于无色，灵敏度上据报道后者比前者可高4倍以上。
另外，还有一种供氢体称ABTS[2, 2'-边氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯啉-6磺酸)]，其反应产物呈蓝绿色，且灵敏度和稳定性均好。尤其是在致癌的潜在可能性方面，ABTS与TMB皆是值得被优选的供氢体。
western blot和elisa用的二抗相同 为什么显色液不同
其实都是HRP催化底物反应,与固相载体无关,他们在反应的整个过程都起到了相同的作用－－供氢体 HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2)和供氢体(DH2).供氢体多为无色的还原型染料,通过反应可生成有色的氧化型染料(D).酶促反应的过程如下:HRP DH2＋H2O2────→D＋2H2O 目前用得较广泛和较满意...
western blot和ELISA有什么差别
一、反应不同：WB可以反映出分子量的信息，ELISA不能。WB一般只能做到半定量，ELISA一般可以定量。二、检测不同：基因翻译蛋白质, PCR可以检测基因的表达量，绝对定量和相对定量。但基因翻译表达蛋白质是个复杂的过程，有可能出现基因量大而蛋白质少，或者相反，甚至其他情况。PCR是从基因层面DNA或mRNA进行...
western blot与ELISE的区别
都是利用抗体的方法检测蛋白。但侧重点不一样。western，灵敏度和特异性更高，半定量，主要检测样品中某种蛋白是否存在，步骤是SDS-Page电泳，转膜，一抗、二抗标记后用酶底物显色或化学发光检测。Elisa检测液体样品中某种蛋白或抗原的含量，灵敏度在pg级，主要运用的仪器是可见光范围的酶标仪。所以一个主...
westernblot的原理及操作步骤,应用有哪些
Western Blot与Southern印迹杂交或Northern印迹杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗.经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体（例如硝酸纤维素膜NC膜）上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学...
免疫印迹与elisa和western blot有什么区别,似乎原理差别不大,谁能细致...
1、原理不同 蛋白质印迹法，其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学...
RT-PCR,Western blot和ELISA三者的区别
RT-PCR，Western blot和ELISA三者的区别PCR是从转录水平上检测目的基因,而非蛋白,从转录到翻译还有复杂的过程,因此基因的表达量与蛋白的表达量不一定是正相关的.WB只能半定量,但是可以检测细胞膜蛋白,这点ELISA做不到ELISA可用定量方法检测蛋白,也就是说你可以观察不同浓度刺激物对目的蛋白的影响 基因翻译...
westernblot内参GAPDH成功了
今天，早早地过去，就是希望把westernblot的流程完成了。1.洗膜。1X TBST洗膜，这个我已经提前配置好了，没有压力。5minX3次。2.孵一抗。按照GAPDH说明书，1:4000稀释一抗。我还以为4ml的一抗稀释液要16ul的抗体。我一想，有点不合理吧。我买的GAPDH总共才25ul，一次性全部用了。好在问了肾...
免疫组化和westernblot有什么区别
1、原理不同：免疫组化利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。先将组织或细胞中的某种化学物质提取出来，以此作为抗原或半抗原，通过免疫动物后获得特异性的抗体，再以此抗体去探测组织或细胞中的同类的抗原物质。westernblot也是利用抗体和抗原之间的结合具有高度的特异性。经过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离的...
RT-PCR,Western blot和ELISA三者的区别
PCR检测基表达量绝定量相定量基翻译表达蛋白质复杂程能现基量蛋白质少或者相反甚至其情况所PCR基层面DNA或mRNA进行检测 Western Blot目前种结合内参蛋白质进行半定量Elisa定量检测某些蛋白、激素等 、目 虽两者都通抗原抗体反应蛋白质进行检测WB主要定性Elisa定性定量 WB所检测般抗原Elisa抗原抗体都检测 WB所...
谁知道ELISA,Western Blot,免疫组化 这三个比较有什么区别,越详细越 ...
免疫组化和elisa所用到的原理 大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。Elisa多用于定量分析，其灵敏度非常高。western bolt 先要进行SDS-PAGE，然后将分离开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体上，而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。免疫学三大...
