转基因烟草定量pcr表达量为0是什么原因

发布网友发布时间：2023-07-13 07:37

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热心网友时间：2024-10-22 14:37

我做过这方面的试验，就把我知道的一些说一说吧。首先，你要用DNA作跑PCR确定转基因是否成功，如果未成功，定量表达肯定是零；其次，（1）做定量是一件非常精细的工作，操作需要非常的谨慎和严格，如果操作不当，也可能影响表达；（2）检查你的引物是否能用，且具有较高的特异性，我一般是退火温度在58~60度；（3）确定你跑定量的模板也就是RNA的质量，跑定量的RNA要求很高，要浓度高且完全没有杂质；（4）加样要快，定量的酶确保没有失活，酶要一直放在冰上，加完样样品也要放冰上，我的酶都是用的时候才从冰箱拿出来，用完马上放回冰箱；（5）我们实验室做定量时一般用的都是新的无菌水、DNTP等，避免RNA被降解或污染，暂时就想到了这么多，数据显示零的时候我不放心会再跑一次，如果还是零，我会从以上几条中逐个排查，别着急，慢慢来