IP 和 CoIP有什么区别?
发布网友
发布时间:2022-04-24 12:24
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热心网友
时间:2023-10-12 18:37
简单的说IP就是用抗体把你要的蛋白免疫沉淀下来,然后去检测它。例如蛋白A在细胞内的蛋白量不同,或者有着不同的翻译后修饰,这是可以用A蛋白的抗体+prorein A beads来IP,从细胞中把A拉下,再用特异的抗体(如磷酸化,泛素化抗体)来检测A的变化。
而co-ip的原理是一样的,自是它检测的是和A相互作用的蛋白,也就是说用A的抗体把A拉下来后,用和A相互作用蛋白B的抗体去检测,来证明A和B之间的相互作用。
拓展资料:
免疫沉淀的实验步骤:
(1)收获细胞,加入适量细胞IP裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上或者4℃裂解30min, 12,000g离心30 min后取上清;
(2)取少量裂解液以备Western blot分析,剩余裂解液将1μg相应的抗体和10-50 μl protein A/G-beads加入到细胞裂解液,4°C缓慢摇晃孵育过夜;
(3)免疫沉淀反应后,在4°C 以3,000 g速度离心5 min,将protein A/G-beads离心至管底;将上清小心吸去,protein A/G-beads用1ml裂解缓冲液洗3-4次;最后加入15μl的2×SDS 加样缓冲液,沸水煮10分钟;
(4)SDS-PAGE, Western blotting或进行质谱分析。
参考资料:免疫共沉淀百度百科词条
热心网友
时间:2023-10-12 18:37
IP是在已知一种蛋白质的抗体情况下,直接用这种抗体将目标蛋白质提取出来,是一种提纯蛋白质的方法。
Co-IP主要用于检测蛋白质与蛋白质之间连接作用,如你想检测蛋白质A与蛋白质B之间是否有相互作用,你手中又有蛋白质A的特异抗体,就将蛋白质A和抗体加入到含有蛋白质B的细胞解液中去,利用抗体提纯,如果蛋白质A,B之间有相互作用,则最后提纯产物是抗体——蛋白质A——蛋白质B。由于最后终产物是多种蛋白质复合物,所以这种技术叫做co-immunoprecipitation,和IP的用途区别还是很大的。
热心网友
时间:2023-10-12 18:37
coip
?
IP 和 CoIP有什么区别?
简单的说IP就是用抗体把你要的蛋白免疫沉淀下来,然后去检测它。例如蛋白A在细胞内的蛋白量不同,或者有着不同的翻译后修饰,这是可以用A蛋白的抗体+prorein A beads来IP,从细胞中把A拉下,再用特异的抗体(如磷酸化,泛素化抗体)来检测A的变化。而co-ip的原理是一样的,自是它检测的是和A相...
ip动态 - StormProxies
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CoIP中IP,IB,HA都是什么(帮我看一下结果图)谢谢~
IP:immunoprecipitation 免疫沉淀(纯化目的蛋白)IB:immunoblotting 免疫印迹,即Western Blotting(显示目的蛋白)HA:带有HA标签的蛋白(抗HA抗体来显示目的蛋白)Input:阳性对照,就是用IP之前的裂解液做IB(排除假阳性干扰)这个实验结果说明:Pi13蛋白与AtCaM蛋白之间存在相互作用。不懂,请追问。。。...
coip实验原理
CoIP(Co-Immunoprecipitation)即免疫共沉淀,以抗体和抗原之间的专一性互作为基础,用于研究蛋白质相互作用的经典方法,是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效技术。属于免疫沉淀技术的一类,常被用于鉴定特定蛋白复合物的中未知蛋白组分。免疫共沉淀的设计理念是,假设一种已知蛋白是某个大的蛋白...
CoIP结果查看
第二, 第一组(只表达HA-cGAS的293T细胞)中没有条带,第二组(共同表达HA-cGAS与NRLP14-FL的293T细胞)没有条带,第三组(只表达STING-HA的293T细胞)有一点点条带,第四组(共同表达STING-HA与与NRLP14-FL的293T细胞)条带明显,这说明NLRP14与STING有相互作用,为什么说有相互作用呢?
免疫共沉淀实验的原理与过程?
coip实验的原理:Co-IP实验通常依赖于特异性判断,即将目标蛋白质及其交互蛋白带有特定抗体空间上结合,并利用这一结合关系来沉淀出其它交互蛋白。免疫共沉淀实验过程:1、细胞裂解:首先需要将细胞或组织裂解释放内部蛋白质,使目标蛋白质能够被识别。2、抗体偶联:接着需要将一个已知与目标蛋白质相互作用的...
ip可以没有input吗
不可以。根据查询相关公开信息显示,CoIP实验是必须设置一个阳性对照组即Input组的,目的是为了验证细胞裂解液中蛋白X比Y的存在。免疫共沉淀(Co-IP)是利用抗原与抗体之间的专一性作用为基础,用于研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的经典方法。
co-ip可以定量吗
co-ip可以定量。根据查询相关资料得知,Co-IP(免疫共沉淀,co-inmunoprecipitation)是经典的利用抗体从样品中捕获靶蛋白及其互作蛋白、复合体的一项技术,能够特异性富集所研究的目的蛋白。
pull-down 和co-IP的区别是什么
pull-down 和co-IP的区别如下:区别一:Co-IP作用:Co-IP,证明两个蛋白在胞内有相互作用,但是这个作用可以是直接相互作用,也可以是形成复合物后的间接相互作用。区别二:pull-down作用:pull-down,胞外纯化蛋白后证明两个蛋白之间有相互作用,这个相互作用必然是直接相互作用。区别三:Co-IP,in ...
coip原理及实验步骤
Co-IP实验步骤 收集蛋白样品 沉淀诱饵蛋白 SDS-PAGE及WB检测 实验对照设置 可能出现的“假阳性”需要设置的对照实验 磁珠与蛋白X非特异性结合 “磁珠+抗体X+抗体Y”磁珠与蛋白Y非特异性结合 “磁珠+蛋白Y”抗X抗体和Y非特异性结合 “磁珠+抗体X+蛋白Y”抗X抗体(或磁珠)会和细胞裂解液...
CoIP中20mM EDTA 的作用是什么 帮我看下结果图吧 谢谢!~
EDTA是用来螯合Ca2+的,这样加了EDTA后,就会抑制Ca2+结合到钙调蛋白AtCAM2/3/5上。实验结果说明AtCAM2/3/5能够与Pi13相结合,并且这种结合依赖于Ca2+。IB是指做western用于检测的时候用了GFP抗体,IP是做免疫共沉淀时候用的beads能够结合HA标签 ...