质粒提出来后,电泳只有一条比较粗的带,为何?酶切后全是拖行带,求解

发布网友发布时间：2023-07-07 12:44

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热心网友时间：2023-09-13 21:19

质粒抽提过程中由于物理机械作用，跑胶后应该有三种构型，跑的最快的是超螺旋构象；其次是线性，相当于你用*性内切酶单酶切把质粒切成一条线性的带；最慢的是开环构型，就是双链中的每条单链上在不同的位置有缺口，但缺口不同时出现在两条链的同一碱基处。一般来说，抽螺旋的构象最浓，其他两个构象看不见是正常的。至于你酶切以后形成弥散的带，原因很多，最常见的是因为你抽提质粒的时候蛋白除的不干净，有其他蛋白酶的干扰；或者抽提过程中有机物除的不干净，比如苯酚或乙醇、异戊醇等，造成了内切酶的星星活性；还有可能是你酶加多了，酶切体系里面甘油浓度太高……这个问题我导师编的书里都有写，他讲课的时候有学生讨论质粒构象在跑胶时那个最快哪个最慢的问题，还要我做了实验验证的，希望你看了之后有所帮助，祝实验顺利。

热心网友时间：2023-09-13 21:19

应该是2条靠的很近的条带，一个是紧密型，一个是开放型。

比较粗，可能是因为你的胶浓度偏低，或者质量不是很好导致分辨率不好。酶切后拖带，更加提示是胶的质量不好。建议换用高质量的胶追问0.7%的胶，这个影响大不？