western blot和ELISA有什么差别
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发布时间：2022-04-19 09:43
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热心网友
时间：2023-07-14 02:56
一、反应不同：
WB可以反映出分子量的信息，ELISA不能。
WB一般只能做到半定量，ELISA一般可以定量。
二、检测不同：
基因翻译蛋白质, PCR可以检测基因的表达量，绝对定量和相对定量。但基因翻译表达蛋白质是个复杂的过程，有可能出现基因量大而蛋白质少，或者相反，甚至其他情况。
PCR是从基因层面DNA或mRNA进行的检测， 而Western Blot是目前一种结合内参对蛋白质进行半定量的方法，Elisa可以定量检测某些蛋白、激素等。
三、灵敏度不同：
灵敏度 一般Elisa的灵敏度要远高于WB，这从一般酶标记物的使用浓度或待检样品的稀释度上就可以看出。可操作性WB一次处理量就是一块胶版，10-20个样品最多了。
Elisa一块96孔板一次可以处理96个样本，可以设置多个复孔、对照、梯度样等来提高检测的可信度。WB操作常见的非特异性条带，膜本底差，显色不好等等缺点在Elisa上表现得要好得多。
扩展资料：
现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较简单，原理如下（二抗用HRP标记）：反应底物为过氧化物+鲁米诺，如遇到HRP，即发光，可使胶片曝光，就可洗出条带。
经过PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如*纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。
参考资料来源：百度百科-蛋白质印迹法
热心网友
时间：2023-07-14 02:56
western blot需要先电泳后转膜，然后免疫结合，虽然操作复杂但不需要很高级的仪器设备
ELISA没有这么复杂的操作，但是需要酶标仪这样比较贵的仪器
western blot的免疫模式基本是抗原结合抗体，抗体结合二抗酶
ELISA模式更加不固定一些，可以是抗原 抗体 二抗酶，也可以是抗原 抗体 抗原酶，或者抗体 抗原 抗体酶等等
western blot更偏向于定性的检测，定量也只能是通过比较的半定量，误差可能很大
ELISA既可以定性也能非常精确的定量
