为什么PCR时会有杂带?引物没有污染,退火温度改了好多次,是特异性不好...
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发布时间：2023-08-05 03:32
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非特异性条带的出现.其原因:一是引物与靶序列不完全互补. 或引物聚合形成二聚体.二是Mg2+离子浓度过高.退火温度过低.及PCR循环次数 过多有关.其次是酶的质和量.往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现.酶量过多有时也会出现非特异性扩增.其对策有:①必要时重新设计引 物.②...
菌液PCR出现杂带是什么原因通常是非特异扩增过多引起，提高退火温度试试PCR产物放置过久考虑产物降解；如果是PCR后及时上样，考虑引物特异性较差或者模板不纯（包括降解以及掺有别的DNA序列）如果用PCR产物做模板的话，量太大也会有这个现象。胶没煮好也会这样
PCR产物的酶切问题结果不确定，第一种可能性是：你PCR反应的温度（退火温度）和时间（延伸时间）没有掌握好。因为PCR反应的特异性决定于退火温度的高低，退火温度越低，应物越容易发生错配，这样的话也会有杂带。第二种可能是酶切不完全，也就是你酶切时间不够，不过你说酶切过夜了，这种可能性不会很大。还有一种可...
PCR退火温度升高反而出现了杂带,为什么首先分析下是不是引物设计的问题。其次是不是对延伸时间进行必要的优化。第三做好阴性对照（无模板，无引物，无模板无引物）实在不行将正确的条带切下来回收，然后作为模板，一般也应该可以扩到。如果仍然出现杂带，那应该是扩增产物进行延伸，这里面的原理比较复杂吧，就跟那个巢式PCR似的。PRC没什么特...
为什么pcr退火温度高,结果特异性强,退火温度低非特异多?非特异带增加。特异带是指你的目的带。非特异带是pcr中扩增出的非目的带。退火是指温度下降，单链DNA与引物结合的过程。温度过低，可造成引物与模板之间只需有一小段可以互补配对就能配对，造成非特异性产物增加。而温度高时，需要引物与模版之间有较长的互补配对序列才能相互配对，特异性增强。
PCR退火温度不稳定是什么原因?设计退火温度是根据引物来的。一般来说，降低温度特异性降低，但得到的产物就更多。所谓杂带，可能是非特异性扩增产物
如果一个PCR反应凝胶检查后,除了目标条带外还出现淡淡的杂带,分析其...这个有很多原因的！最大的原因也是最常见的原因是：1模板不纯，二引物特异性不高，三：退火温度偏低。第四：酶的活性过高，五镁离子浓度不适 解决的办法有：1：将模板稀释，2：提高退火温度或者递减PCR，3：降低PCR各个组分的量，如酶的量减半，引物和DNTP的量也减半 4：重新设计引物 ...
早起做pcr时出现条带换了引物后就不在出现为什么物理原因：变性对PCR扩增来说相当重要，如变性温度低，变性时间短，极有可能出现假阴性;退火温度过低，可致非特异性扩增而降低特异性扩增效率退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。有时还有必要用标准的温度计，检测一下扩增仪或水溶锅内的变性、退火和延伸温度，这也是PCR失败的原因之一。靶...
我做PCR为什么筛温度的时候都能P出条带,等到筛好温度了却没有条带了...PCR的模板或引物比较复杂时，各种怪事都会有。如果你的实验体系没问题，你可以试试先以较高退火温度p上5个循环，再以你筛的温度p上30个循环。或者把你的目的条带切胶回收，稀释后作模板再p。
pcr引物设计过程中,为什么GC过多易出现非特异性条带。为什么降低退火温 ...GC含量高，说明解链温度高，目的条带在较高温度才会解链，而在未达到解链温度时，引物会以未完全解链的DNA为模板，进行PCR非特异性扩增，所以易出现非特异性条带。降低退火温度，DNA复性减缓，增加非特异性互补机会，使非特异性条带增多。
