pcr体系问题

（1）酶失活或在反应体系中未加入酶。TaqDNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。（2）模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。（3）变性温度是否准确：PCR仪指示温度与实际温度是否相符，过高酶在前几...

1、PCR体系问题：检查PCR体系有没有问题，也就是试剂有没有问题，比如扩其他的基因能不能扩出来。2、引物问题：其他基因能扩出来，就要考虑引物有没有问题，根据引物特征优化扩增条件，片段是不是太大，序列有没有特殊性。3、模板质量问题：考虑模板质量有没有问题，模板里面有没有目的基因的片段等等。

【答案】：B 在一个典型的PCR反应体系中需加人：适宜的缓冲液、微量的模板DNA，4×dNTPs、耐热性多聚酶，MF2+和两个合成的DNA引物。故A，C，D，E均是PCR反应体系的组成成分。故选B项。

PCR扩增有时出现涂抹带或片状带或地毯样带。其原因往往由于酶量过多或酶的质量差，dNTP浓度过高，Mg2+浓度过高，退火温度过低，循环次数过多引起。其对策有：减少酶量，或调换另一来源的酶。减少dNTP的浓度。适当降低Mg2+浓度。增加模板量，减少循环次数。参考资料来源：/baike.baidu.com/item/PCR%E6%...

标准的PCR反应体系：10×扩增缓冲液 10ul 4种dNTP混合物 各200umol/L 引物 各10～100pmol 模板DNA 0.2ug Taq DNA聚合酶 2.5u Mg2+ 1.5mmol/L 加双或三蒸水至 100ul PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+ 引物：引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物...

体系过大会导致整个反应体系升温不匀,特别是体系中心温度和持续时间都少于靠近管壁的部分,会造成特异性条带增多或弥散的现象.一般建议反应体系不要超过100微升.

扩增体系配制错误会导致pcr扩增没有产物。扩增体系配制错误，pcr扩增是不会成功的。pcr扩增没有产物的原因也有酶失活或在反应体系中未加入酶，模板中含有杂质，变性温度是否准确等。

确认需要更改的具体成分和浓度，确认新的成分是否兼容。1、确认需要更改的具体成分和浓度：不同的PCR反应需要不同的成分和浓度，需要明确要更改的具体成分和浓度。2、确认新的成分是否兼容：要更改的成分与其他成分不兼容，会导致PCR反应失败或结果不准确，需要确认新的成分是否兼容。

如果你的实验室对pcr反应体系已摸索很清楚，就不用换反应体系，没有扩出dna可能跟你的操作有关，你可以做个阳性对照，就可以知道是否是体系的问题，一般实验条件体系摸索的很清楚的实验室，体系一般不会有问题。如果你对实验条件还是在探索阶段，当然要通过不断调试来找到最佳反应体系，建议多找些相关文献...

PCR反应条件为温度、时间和循环次数。温度与时间的设置：基于PCR原理三步骤而设置变性-退火-延伸三温度点。在标准反应中采用三温度点法，双链DNA在90～95℃变性，再迅速冷却至40 ～60℃，引物退火并结合到靶序列上，然后快速升温至70～75℃，在Taq DNA 聚合酶的作用下，使引物链沿模板延伸。对于较短...