试述什么是细胞化学染色,说明其基本步骤,并指出在临床中有哪些应用?
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发布时间：2023-08-03 12:41
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时间：2023-08-03 15:14
一）固定
固定有物理法与化学法，物理法为干燥和火焰固定，化学法最常用的是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。
（二）显示
1、偶氮偶联法：利用人工合成的酶底物，在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐结合引起偶氮偶联，使其形成不溶性的偶氮色素，以此证明酶的存在。
2、联苯胺法：粒细胞和单核细胞中的过氧化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧，使无色的联苯胺形成蓝色沉淀。
3、普鲁士蓝法：细胞内、外铁与酸性亚铁*作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。
细胞化学染色图册
4、雪夫反应：过碘酸氧化细胞内糖类中乙二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用，使无色品红形成红色沉淀。
5、金属沉着法：其他尚有物理学方法，如脂溶性染料染色（显示脂质）、荧光显示、放射自显影以及体外活体染色亦常用于临床血液细胞学诊断。
（三）细胞化学定量
粗略估量，以染色反的强弱，受色的深浅，人为地区别为阴性和各种程度的阳性。
百分法，只能反映细胞阳性率，不能反映受色强弱。
积分法，是常用的半定量法，将等级估量与百分率相结合它既反映了细胞阳性率的高低，又反映了细胞受色的强弱。
细胞化学染色 -
过氧化物酶染色
（一）四甲基联苯胺法生物
原理
粒细胞和单核细胞的胞浆内的髓过氧化物酶（POXorMPO）分解过氧化氢，释放新生态氧，使无色联苯胺氧化成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕色化合物沉着于细胞质内。
试剂
1%TMB、亚硝基铁*饱和溶液、1%过氧化氢溶液、稀过氧w化氢溶液、瑞氏染色液
操作
1、取0.1%TMB乙醇溶液lml，加亚硝基铁*饱和溶液10ml，溶液呈淡棕*。
2、在新鲜干燥的血片上，加混合溶液0.5ml,放置lmin后，再加稀过氧化氢溶液0.7ml，染色6min。
3.瑞氏染液复染15～20min。
4.油镜镜检。
结果
细胞质内有蓝黑色颗粒者为阳性。
（－）无颗粒沉着；
（±）颗粒细小，分布稀疏；
（+）颗粒较粗，局灶分布；
（++）颗粒粗大，分布较密，占胞质1/2~2/3；
（+++）颗粒粗大，呈团块分布；
（++++）全部胞质均部满颗粒，可覆胞核。
临床意义
POX主要分布在粒细胞和单核细胞内，随着粒细胞成熟的程度而逐渐增强，中性分叶核粒细胞为强阳性。嗜酸性粒细胞阳性程度最强，其阳性颗粒比中性粒细胞粗大，有折光。碱性粒细胞为阴性。
（2）单核细胞：
原始单核细胞为阴性反应，幼稚单核细胞和成熟单核细胞呈弱阳性反应，颗粒细小，弥散分布。
（3）其他细胞
淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、组织细胞、巨核细胞均呈阴性反应。
（4）血小板过氧化物酶
主要定位于幼稚型巨核细胞的核膜上，可作为原巨核细胞的一种标志物，有助于FABM7的识别。
（5）过氧化物酶染色
主要用于鉴别急性白血病类型，急性髓细胞白血病多呈阳性反，以M3和M2型反应最强，MI和M5型反较弱，S故有助于区别M3和M5型。S急性淋巴细胞白血病呈POX阴性反，故为急性髓细胞和淋巴细胞白血病鉴别的重要指标。
